前脳基底部コリン作動性神経特異的コンディショナルノックアウトマウスの作成と解析

基底前脑胆碱能神经元特异性条件敲除小鼠的创建和分析

基本信息

  • 批准号:
    16015296
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.5万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    2004
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2004 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

前年度までの研究成果を踏まえて、本年度はL3/Lhx8遺伝子の機能を以下の二つの方法から解析することとした。1つはL3/Lhx8遺伝子ゲノム上流領域10kbを単離し、この下流にCre recombinase遺伝子を結合させることにより、L3/Lhx8遺伝子が本来発現する細胞(前脳基底部コリン作動性神経)においてCre recombinaseを発現するトランスジェニックマウスを作成する方法であり、これについてはトランスジェニックマウス作成用のコンストラクトが完成し、受精卵への導入、トランスジェニックマウスの産生にまで至った。現在、複数のトランスジェニックラインにおいてCre recombinaseの発現の程度を免疫組織化学的に検出中である。この解析により、当該細胞においてより強くCre recombinaseを発現するラインを選択し、このラインと既存のFloxマウス(例えばFloxed BDNFマウスやFloxed GABA受容体マウスなど)と掛け合わせることにより、前脳基底部コリン作動性神経でのみ特定の遺伝子をノックアウトするマウスが作成可能となる。もう1つはL3/Lhx8遺伝子がアセチルコリン作動性神経の発達に密接に関与していることがノックアウトマウスの解析から推測されたので、Neuro2A細胞のIn vitro分化系を用いて、この系においてSiRNAによるL3/Lhx8遺伝子ノックダウン実験を行った。Neuro2A細胞はレチノイン酸刺激によりコリン作動性神経細胞に分化するが、L3/Lhx8遺伝子はこの際に発現が高まり、且つノックダウンするとコリン作動性マーカーの発現低下とGABA作動性マーカーの発現上昇が同時に観察された。この結果はL3/Lhx8遺伝子がコリン作動性分化を促すと同時にGABA作動性分化を抑制している可能性を示唆するものである。
The research results of the previous year have been reviewed, and the functions of the L3/Lhx8 gene have been analyzed in the following two ways: 1. The L3/Lhx8 gene was cloned into the upstream region of 10kb, and the downstream region of 10kb was cloned into the downstream region of 10 kb. The method for producing Cre recombinase (prebasal cell activation neuron) is described as follows: complete, introduction of zygote, generation of Cre recombinase. Now, the degree of Cre recombinase expression in the complex protein was detected by immunohistochemistry. This analysis is performed when the cell is in the middle of the cell, and when the cell is in the middle of the cell, the cell is selected and the cell is selected from the existing Flox receptor (e.g. Floxed BDNF receptor and Floxed GABA receptor). The expression of L3/Lhx8 gene In Neuro2A cells was estimated by analyzing the expression of L3/Lhx8 gene in vitro differentiation line. Neuro-2A cells respond to acid stimulation by increasing the activity of GABA and increasing the activity of L3/Lhx8 genes. The results showed that the L3/Lhx8 gene could promote the differentiation of GABA action and inhibit it.

项目成果

期刊论文数量(10)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
L3/Lhx8: an important selector gene determining whether cholinergic or UABAergic cell fates.
L3/Lhx8:决定胆碱能细胞或 UABA 能细胞命运的重要选择基因。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Ozaki;H.;川上 潔;Kondo S. et al.;Tatsumi K. et al.;Manabe T. et al.
  • 通讯作者:
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  • DOI:
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  • 发表时间:
    2005-04-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    4.2
  • 作者:
    Tatsumi, K;Haga, S;Wanaka, A
  • 通讯作者:
    Wanaka, A
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  • DOI:
    10.1179/016164104225014049
  • 发表时间:
    2004-04-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
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  • 作者:
    Nonaka, M;Yoshikawa, M;Sakaki, T
  • 通讯作者:
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  • DOI:
    10.1038/ncb1213
  • 发表时间:
    2005-02-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    21.3
  • 作者:
    Kondo, S;Murakami, T;Imaizumi, K
  • 通讯作者:
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  • DOI:
    10.1111/j.0953-816x.2004.03415.x
  • 发表时间:
    2004-06-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    3.4
  • 作者:
    Mori, T;Zhang, YX;Wanaka, A
  • 通讯作者:
    Wanaka, A
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    0
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  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    田中 達英;大野 伸彦;齊藤 成;Truc Quynh Thai;西村 和也;新城 武明;河邉 良枝;中原 一貴;石西 綾美;森田-竹村 晶子;辰巳 晃子;和中 明生;本多睦美・道林克禎・藤井昌和・山本由弦・針金由美子;溝口 友樹,小山 元道,野口 博司;Kiyokazu Agata
  • 通讯作者:
    Kiyokazu Agata

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