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HIV感染機構の解明:ケモカイン受容体・リガンド相互作用の構造生物学的研究

阐明HIV感染机制：趋化因子受体-配体相互作用的结构生物学研究

基本信息

批准号：
16017223
负责人：
寺沢宏明
金额：
$ 6.91万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017223/
关键词：
転移交差飽和法ケモカインケモカイン受容体 RANTES CCR5 GPCR HIV Budded virus

项目摘要

GPCRなどの膜蛋白質とリガンドとの相互作用を原子レベルで解析するためには、相互作用解析のための適切な手法の確立と、活性を保持した標的膜蛋白質の大量発現系の構築が必要である。我々は、巨大分子上の受容体に対するリガンド分子の結合部位を同定出来る新規NMR手法である、転移交差飽和法を開発した。また近年、昆虫細胞発現系において発芽するリコンビナントバキュロウイルス(budded virus : BV)上に、活性を保持したリコンビナント膜蛋白質が発現していることが報告されている。我々はCCR5発現BV(CCR5-BV)を用いた転移交差飽和実験を行うことにより、RANTES上のCCR5に対する結合部位を同定した。また、本手法が適用可能なリガンド:受容体比の範囲を明らかにするため、CCR5-BV上に発現したCCR5の定量を行なった。さらに、RANTESとCCR5との相互作用に関する速度論的解析を行った。これらにより、本手法の論理的基盤を確立した。我々が同定したRANTES上のCCR5結合部位が、CCR5の活性化にどのような役割を果たしているかについては不明であった。そこで、本研究で明らかになった結合部位を介する相互作用の役割を調べるため、同定した結合部位、シグナル伝達に重要と考えられているN末端、その他の領域それぞれに変異を導入し、ケモタキシスアッセイを行った。その結果、同定した結合部位に変異を導入すると、受容体との親和性は低下するが、シグナル伝達活性は保持されること、一方、N末端領域への変異導入は、シグナル伝達活性を大きく低下させることがわかった。以上、本研究により、リガンド上の膜蛋白質結合部位を決定する手法を開発した。得られた知見は、抗HIV薬の開発やケモカイン-ケモカイン受容体相互作用の理解に大きく貢献するものであると考える。

GPCR などのmembrane protein とリガンドとのinteraction をatomic レベルでanalytic するためには, interaction solution It is necessary to establish a suitable method for analyzing and maintain the activity of target membrane proteins and to construct a large number of systems. We have determined the acceptor binding site on the giant molecule and the binding site of the molecule using the new standard NMR technique, and the differential saturation method has been developed. In recent years, insect cell viruses have emerged as budded viruses: BV) on the に, the activity is maintained and the membrane protein is maintained. I used the CCR5 BV (CCR5-BV) to transfer the difference between the CCR5 and the RANTES.また、The application of this technique is possible: the receptor ratio is not limited to the standard, and the CCR5-BV is quantitatively correct.さらに、RANTESとCCR5とのInteraction に Off する Analysis of Velocity Theory を行った. The basis of this method's theory has been established. The binding site of CCR5 on RANTES is determined, and the activation of CCR5 is unknown.そこで、This study is based on the binding part of the で明らかになったinteraction のservice cut をadjusted べるため、the same binding part and シグナル伝达に Important と卡えられているN Terminal, そのhis domain それぞれに変different を Import し, ケモタキシスアッセイを行った. The result of the same is the same as the binding site, the difference is introduced, the affinity of the receptor is low, and the activity is maintained Hold the されること, one party, the N-terminal field への変different import は, シグナル伝大を大きくlow させることがわかった. As mentioned above, the method used in this study was determined based on the binding site of membrane proteins on the membrane and the ribonucleoside. He has contributed to the understanding of HIV-resistant HIV receptor interaction and the understanding of receptor interaction.

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Identification and characterization of a second chromophore of DNA photolyase from Thermus thermophilus HB27

DOI：
10.1074/jbc.m507972200
发表时间：
2005-10-28
期刊：
JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
影响因子：
4.8
作者：
Ueda, T;Kato, A;Shimada, I
通讯作者：
Shimada, I

An NMR method for the determination of protein-binding interfaces using dioxygen-induced spin-lattice relaxation enhancement.

一种使用分子氧诱导的自旋晶格弛豫增强来确定蛋白质结合界面的 NMR 方法。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Biol.Chem. 280・43
影响因子：
0
作者：
Aravin;A.(7名);Kuramochi-Miyagawa;S.;Nakano;T.(6);Tuschl,T;Addy C.;Takeuchi K.;Yokogawa M;Nakasako M;Ueda T
通讯作者：
Ueda T

^1H,^<13>C,^<15>N backbone resonance assignments of the hyaluronan-binding domain of CD44.

CD44的乙酰透明质酸结合结构域的^ 1 H、^ 13 C、^ 15 N主链共振分配。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J.Biomol.NMR 29
影响因子：
0
作者：
Gotoh;B.;Nishitsuji H. et al.;Takeda Mitsuhiro et al.
通讯作者：
Takeda Mitsuhiro et al.

Backbone resonance assignments for the Fv fragment of catalytic antibody 6D9 complexed with a transition state analogue

与过渡态类似物复合的催化抗体 6D9 的 Fv 片段的主链共振分配

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Journal of Biomolecular NMR 33
影响因子：
0
作者：
Mugishima;M.Tsuda;M.et al.;M.Kitajima;S.Horie;H.Takayama;K.Matsumoto;K.Matsumoto;Masayoshi Sakakura;Masayoshi Sakakura
通讯作者：
Masayoshi Sakakura

Direct determination of interface between membrane and peptide using NMR cross-saturation method

使用 NMR 交叉饱和法直接测定膜和肽之间的界面