p27^<Kip1>の発現量低下を伴う予後不良の癌の分子標的の同定

鉴定与 p27^<Kip1> 表达降低相关的预后不良癌症的分子靶点

基本信息

批准号：
16021220
负责人：
北川雅敏
金额：
$ 4.35万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16021220/
关键词：
大腸癌 p27Kip1 タンパク質分解 Skp2 細胞周期

项目摘要

[目的]癌の予後不良とp27^<Kip1>の発現量低下が相関することに注目し、p27^<Kip1>の発現量低下に関連する癌の予後不良化の原因遺伝子の同定を行い、予後不良の癌の診断マーカーの開発や分子標的治療のターゲットを決定する。また、p27^<Kip1>の分解機構の解明も癌の悪性化機構の理解に必要であることからp27^<Kip1>の新たなユビキチンリガーゼの同定を目指す。[研究結果]我々はジーンターゲティングによりp27^<Kip1>のヘテロノックアウトヒト大腸癌細胞HCT-p27hKOを樹立し、p27の発現量低下を確認してモデル細胞とした。この細胞と親株HCT116を用いてマイクロアレイ解析により特異的に発現が変動する遺伝子を同定した。これらPPAG(Poor Prognosis Associated Gene candidates)のなかでPPAG4は、HCT-hp27-hKOにおいてPPAG4遺伝子の発現が有意に亢進していることがわかり、リアルタイムRT-PCB法によって確認された。このPPAG4の発現亢進はp27^<Kip1>に対するsiRNAを用いたノックダウンによっても起こり、p27^<Kip1>ノックアウトマウスの線維芽細胞においても確認された。さらにp27^<Kip1>の分解因子であるSkp2を導入したHCT116細胞でもPPAG4の発現がみられ、p27^<Kip1>が増加しているSkp2ノックアウトマウスの線維芽細胞においては逆にPPAG4の発現が低下していた。以上によりPPAG4はp27^<Kip1>の分解が亢進の下流にある遺伝子であることが判明した。また一方で、我々はCDK阻害タンパク質p27をユビキチン化し分解に導く新たなユビキチンリガーゼを同定した。

[目的]注意到，癌症的预后不良以及p27^<kip1>表达水平的降低，我们确定了导致癌症预后不良的基因，与p27^<kip1>的表达水平降低相关，并与癌症预后不良的诊断标记物的诊断标记物相关，并确定了分子靶向治疗的靶标。此外，阐明p27^<kip1>的降解机制对于理解癌症恶性肿瘤的机制也是必要的，因此我们旨在确定p27^<kip1>的新的泛素连接酶。 [结果]我们建立了HCT-P27HKO，这是一种具有p27^<kip1>的异性虫结肠癌细胞，并确认p27的表达水平降低，使其成为模型细胞。使用该细胞和父母菌株HCT116通过微阵列分析鉴定了具有特异性表达变异的基因。在这些PPAG（预后较差的基因候选物）中，发现HCT-HP27-HKO中的PPAG4基因表达显着增加，并通过实时RT-PCB方法证实。 PPAG4的表达增加也是由使用p27^<kip1>敲除引起的，并且在p27^<kip1>敲除小鼠的成纤维细胞中也得到了证实。此外，在SKP2引入的HCT116细胞中还观察到了PPAG4的表达，p27^<kip1>的降解因子和pPAG4表达降低了SKP2敲除小鼠的成纤维细胞，其中p27^<kip1>增加了。这表明PPAG4是一个容易发生p27^<kip1>降解的下游基因。另一方面，我们已经确定了一种泛素化的新型泛素连接酶，并导致CDK抑制蛋白p27的降解。