p53制御分子Pirh2の新たなユビキチン化標的分子とがん化との関連

p53调控分子Pirh2的新泛素化靶分子与癌症发生的关系

基本信息

批准号：
18012021
负责人：
北川雅敏
金额：
$ 7.04万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18012021/
关键词：
細抱周期癌ユビキチン p27Kipl 細胞周期 p53

项目摘要

本研究ではp53のユビキチンリガーゼとして報告されているPirh2の新たな機能を解明し、がん化との関連を明らかにすることを目的とする。これまでの我々の解析でPirh2のp53をユビキチン化する活性は低いことを示唆するデータが出ており、Pirh2のp53以外の標的の同定と機能の解明を目指す。我々はp27KiplのN末端をbaitとしたYeast Two-hybridスクリーニングで、Pirh2を検出した。このことからp27が新たなPirh2の基質である可能性が示唆され、その検証を行なった。その結果、Pirh2は哺乳動物細胞内で過剰発現させるとp27と結合し、p27のユビキチン化と分解を充進する能力を有することがわかった。この機能はPirh2のリングフィンガードメイン依存的であり、Pirh2がp27の新たなユビキチンリガーゼの候補であることが示唆された。さらに内因性Pirh2をsiRNAによりノックダウンすると,p27は安定化することがわかった。T98G細胞をGO/G1に同調し、Pirh2をsiRNAによりノックダウンしたあと、細胞周期を再開させ、Pirh2の細胞周期進行における機能を解析した。その結果、G1期においてp27の分解が抑制され、細胞周期のG1/S進行が著明に抑制された。以上よりPirh2はp27の新たなユビキチンリガーゼとして細胞周期のG1/S進行に関与していることが強く示唆された。

这项研究旨在阐明PIRH2的新功能，PIRH2据报道是p53的泛素连接酶，并阐明了其与癌症发展的关系。我们先前的分析表明，PIRH2泛素化p53的活性很低，我们旨在识别和阐明PIRH2 p53以外的其他目标的功能。我们在酵母的两杂化筛网中检测到PiRH2，并以p27kipl为诱饵的N末端。这表明P27可能是PIRH2的新底物，我们已经对其进行了验证。结果表明，在哺乳动物细胞中过表达时，PIRH2与P27结合，并且具有增强p27泛素化和降解的能力。此功能是依赖PIRH2的环形域，这表明PIRH2是P27新型泛素连接酶的候选者。此外，发现使用siRNA稳定的p27撞击内源性PIRH2。将T98G细胞与GO/G1同步，用siRNA击倒PIRH2，并恢复细胞周期，并分析PIRH2在细胞周期进程中的功能。结果，在G1期间抑制了P27降解，并且细胞周期中的G1/S进展得到了显着抑制。上述强烈表明PIRH2参与细胞周期的G1/S进展，作为P27的新泛素连接酶。