個体レベルでの細胞周期のリアルタイムイメージングの試み

尝试在个体水平上对细胞周期进行实时成像

基本信息

  • 批准号:
    17659079
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.11万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2005
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2005 至 2006
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

[目的]本研究は細胞周期のリアルタイムイメージングを行うため、細胞周期特異的遺伝子であるp27^<Kip1>およびサイクリン遺伝子群に注目してその量的制御機構を解析する。さらにその知見を利用して細胞周期のリアルタイムイメージングを目指す。[研究成果]グリオブラストーマ細胞であるT98G細胞に血清飢餓かつ接触阻止を施し、GOに同調し、その後トリプシン処理で回収し、蒔き直しで10%血清を含む培地で細胞周期をG1期に進行させた。0時間から28時間まで3時間ごと経時的に細胞を回収し、細胞抽出液を調整し、ウエスタンプロットを行った。蛋白質発現の観察はp27^<Kip1>、サイクリンD1,サイクリンE、サイクリンA、サイクリンB、p53を対象として細胞周期における発現パターンを解析した。p27^<Kip1>はGO/G1において既に発現しているので転写より分解によって発現量が変動する。我々はp27^<Kip1>の新たなユビキチンリガーゼとしてPirh2を同定した。そこでp27^<Kip1>の分解に関与する既知のユビキチンリガーゼSkp2に加えPirh2の発現変動も解析対象に加えた。その結果、G1後期でサイクリンEが上昇、S期に開始と同時にサイクリンAが発現し、G2/MでサイクリンBが急増した。一方でp27^<Kip1>はG1期中期から減少し、それに対応してPirh2はG1期中期から徐々に発現が上昇した。Skp2の発現はS期から亢進することがわかった。p53はこの細胞では変異型のため細胞周期を通じて安定であった。これらの分子を追跡することで細胞周期のモニターが可能なことが判明した。一方でサイクリンD1のレポーターアッセイ系を構築し、サイクリンD1の細胞周期依存的転写を観察出来るようになった。
[Purpose] This study focuses on cell cycle analysis and cell cycle-specific genetic factors.あるp27^<Kip1>およびサイクリン伝子群にAttentionしてそのquantity control mechanismをanalyticsする.さらにその知见をutilize the して cell cycle のリアルタイムイメージングを Eye finger す. [Research results] グリオブラストーマcells であるT98G cells にserum starvation かつcontact prevention をし、GO に synchronization し, その后トリプシン treatment and recovery し, 莳きstraight 10% serum を containing むpedi で cell cycle を G1 phase に させた. 0 time, 28 time, 3 time, にCell collection, cell extraction solution adjustment, ウエスタンプロットを行った. Protein 発appearの観看はp27^<Kip1>, サイクリンD1, サイクリンE, サイクリンA, サイクリンB, p53を対 resembles としてcell cycle における発existing パターンをanalytic した. p27^<Kip1>はGO/G1において与に発appearsしているので転WRitsより decomposesによって発真人が変动する. I々はp27^<Kip1>の新たなユビキチンリガーゼとしてPirh2を同定した. The decomposition of そこでp27^<Kip1> and the analysis of the already known のユビキチンリガーゼSkp2に加えPirh2の発成剉动もanalytic 対相に加えた.その results, G1 late stage でサイクリンEが rises, S period starts とsimultaneously にサイクリンAが発appears, G2/M でサイクリンB が快increases した. One party's でp27^<Kip1>はG1 mid-term is decreasing, and それに対応してPirh2 is G1 mid-term is rising. Skp2's の発appears in the S period and is in progress. p53 is a cell that is abnormal and has a different cell cycle. It is stable and stable.これらのmoleculesをtrackingすることでcell cycleのモニターがpossibleなことがdeterminationした. One party's でサイクリンD1のレポーターアッセイ system をconstructionし、サイThe cell cycle-dependent expression of クリンD1 has been observed.

项目成果

期刊论文数量(13)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Immunohistochemical and genetic features of gastric and the metastatic liver GISTs, sequential analyses.
胃和转移性肝 GIST 的免疫组织化学和遗传特征,序贯分析。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Nabetani;A.;Ishikawa;F.;Kikuchi.H.et al.
  • 通讯作者:
    Kikuchi.H.et al.
Up-regulation of GPR48 induced by down-regulation of p27Kip1 enhances carcinoma cell invasiveness and metastasis
  • DOI:
    10.1158/0008-5472.can-06-2629
  • 发表时间:
    2006-12-15
  • 期刊:
  • 影响因子:
    11.2
  • 作者:
    Gao, Yun;Kitagawa, Kyoko;Kitagawa, Masatoshi
  • 通讯作者:
    Kitagawa, Masatoshi
Generation of a constitutively active mutant of human GPR48/LGR4, a G-protein-coupled receptor.
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由SCF^<Skp2>依赖性泛素化介导的Tobl降解。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Hiramatsu Y et al.
  • 通讯作者:
    Hiramatsu Y et al.
Role of the second-largest subunit of DNA polymerase α in the interaction between the catalytic subunit and hyperphosphorylated retinoblastoma protein in late S phase.
DNA聚合酶α第二大亚基在S期晚期催化亚基和过度磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白之间相互作用中的作用。
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北川 雅敏其他文献

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    $ 2.11万
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    $ 2.11万
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    2004
  • 资助金额:
    $ 2.11万
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  • 财政年份:
    2003
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    $ 2.11万
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    2005
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    2002
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    2002
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    $ 2.11万
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    13670723
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  • 批准号:
    13214077
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    2001
  • 资助金额:
    $ 2.11万
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    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
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  • 批准号:
    12031215
  • 财政年份:
    2000
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
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知道了