個体レベルでの細胞周期のリアルタイムイメージングの試み

尝试在个体水平上对细胞周期进行实时成像

基本信息

  • 批准号:
    17659079
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.11万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2005
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2005 至 2006
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

[目的]本研究は細胞周期のリアルタイムイメージングを行うため、細胞周期特異的遺伝子であるp27^<Kip1>およびサイクリン遺伝子群に注目してその量的制御機構を解析する。さらにその知見を利用して細胞周期のリアルタイムイメージングを目指す。[研究成果]グリオブラストーマ細胞であるT98G細胞に血清飢餓かつ接触阻止を施し、GOに同調し、その後トリプシン処理で回収し、蒔き直しで10%血清を含む培地で細胞周期をG1期に進行させた。0時間から28時間まで3時間ごと経時的に細胞を回収し、細胞抽出液を調整し、ウエスタンプロットを行った。蛋白質発現の観察はp27^<Kip1>、サイクリンD1,サイクリンE、サイクリンA、サイクリンB、p53を対象として細胞周期における発現パターンを解析した。p27^<Kip1>はGO/G1において既に発現しているので転写より分解によって発現量が変動する。我々はp27^<Kip1>の新たなユビキチンリガーゼとしてPirh2を同定した。そこでp27^<Kip1>の分解に関与する既知のユビキチンリガーゼSkp2に加えPirh2の発現変動も解析対象に加えた。その結果、G1後期でサイクリンEが上昇、S期に開始と同時にサイクリンAが発現し、G2/MでサイクリンBが急増した。一方でp27^<Kip1>はG1期中期から減少し、それに対応してPirh2はG1期中期から徐々に発現が上昇した。Skp2の発現はS期から亢進することがわかった。p53はこの細胞では変異型のため細胞周期を通じて安定であった。これらの分子を追跡することで細胞周期のモニターが可能なことが判明した。一方でサイクリンD1のレポーターアッセイ系を構築し、サイクリンD1の細胞周期依存的転写を観察出来るようになった。
[Objective] This study aims to analyze the regulatory mechanism of cell cycle differentiation and cell cycle specific <Kip1>gene transfer. This knowledge is used to guide the development of cell cycles. [Results] T98G cells were treated with serum starvation, G1 phase, GO regulation, post-treatment, and 10% serum. Time 0:28:30 p.m. Cell recovery, cell extract adjustment, and cell recovery Protein development is observed in p27^<Kip1>, Scri D1, Scri E, Scri A, Scri B, p53, and analyzed in cell cycle. p27^<Kip1>GO/G1 is the first time that the amount of time spent in the process has changed. I'm sorry, but I'm sorry<Kip1>. The resolution of the p27^<Kip1>is related to the known transmission of the Skp2 and the occurrence of the Pirh2. As A result, G1 late stage On the other hand, p27 decreased in the middle of <Kip1>G1 and increased in Pirh2. Skp2 appears in the S phase. p53 cell cycle The molecular trace of the cell cycle is not known. A cell cycle dependent system of D1 is constructed and detected.

项目成果

期刊论文数量(13)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Immunohistochemical and genetic features of gastric and the metastatic liver GISTs, sequential analyses.
胃和转移性肝 GIST 的免疫组织化学和遗传特征,序贯分析。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Nabetani;A.;Ishikawa;F.;Kikuchi.H.et al.
  • 通讯作者:
    Kikuchi.H.et al.
Up-regulation of GPR48 induced by down-regulation of p27Kip1 enhances carcinoma cell invasiveness and metastasis
  • DOI:
    10.1158/0008-5472.can-06-2629
  • 发表时间:
    2006-12-15
  • 期刊:
  • 影响因子:
    11.2
  • 作者:
    Gao, Yun;Kitagawa, Kyoko;Kitagawa, Masatoshi
  • 通讯作者:
    Kitagawa, Masatoshi
Generation of a constitutively active mutant of human GPR48/LGR4, a G-protein-coupled receptor.
Degradation of Tobl mediated by SCF^<Skp2>-dependent ubiquitination.
由SCF^<Skp2>依赖性泛素化介导的Tobl降解。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Hiramatsu Y et al.
  • 通讯作者:
    Hiramatsu Y et al.
Role of the second-largest subunit of DNA polymerase α in the interaction between the catalytic subunit and hyperphosphorylated retinoblastoma protein in late S phase.
DNA聚合酶α第二大亚基在S期晚期催化亚基和过度磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白之间相互作用中的作用。
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北川 雅敏其他文献

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  • 通讯作者:
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    2024
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    $ 2.11万
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    $ 2.11万
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  • 财政年份:
    2007
  • 资助金额:
    $ 2.11万
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    17013037
  • 财政年份:
    2005
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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  • 批准号:
    16026214
  • 财政年份:
    2004
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
p27^<Kip1>の発現量低下を伴う予後不良の癌の分子標的の同定
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  • 批准号:
    16021220
  • 财政年份:
    2004
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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  • 批准号:
    15023223
  • 财政年份:
    2003
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
RBタンパク質のリン酸化と分解を介した標的遺伝子選択的制御機構
RB蛋白磷酸化和降解的靶基因选择性调控机制
  • 批准号:
    14033218
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

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増殖細胞におけるCdk2の細胞内輸送とp27によるCdk2活性の制御機構の解明
阐明增殖细胞中Cdk2的胞内转运以及p27对Cdk2活性的控制机制
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Deciphering the mechanisms underlying cancer development induced by deregulation of proteolysis
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    2005
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    $ 2.11万
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サイクリンD1の心筋特異的核内発現によるヒト心筋細胞再生法の開発
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  • 财政年份:
    2005
  • 资助金额:
    $ 2.11万
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    Grant-in-Aid for Exploratory Research
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  • 批准号:
    15590846
  • 财政年份:
    2003
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
細胞周期制御活性化因子サイクリンの前立腺癌ホルモン療法抵抗性獲得に及ぼす影響
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  • 批准号:
    14770818
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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  • 批准号:
    14026038
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
Elucidation of the Mechanism for the cell cycle regulation by a novel isoform of p27^<Kip1> in the vascular cells
阐明血管细胞中新型 p27^<Kip1> 亚型调节细胞周期的机制
  • 批准号:
    13670723
  • 财政年份:
    2001
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Regulation of cyclin-dependent kinases
细胞周期蛋白依赖性激酶的调节
  • 批准号:
    13043015
  • 财政年份:
    2001
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
p27^<Kip1>新規分子種の同定とがん抑制因子としての機能解明
p27^<Kip1>新分子种类的鉴定及其抑癌功能的阐明
  • 批准号:
    13214077
  • 财政年份:
    2001
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
小脳顆粒細胞・前駆細胞の生存・増殖調節
小脑颗粒细胞和祖细胞的生存和增殖调节
  • 批准号:
    12031215
  • 财政年份:
    2000
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
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知道了