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個体レベルでの細胞周期のリアルタイムイメージングの試み

尝试在个体水平上对细胞周期进行实时成像

基本信息

批准号：
17659079
负责人：
北川雅敏
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659079/
关键词：
細胞周期サイクリン p27

项目摘要

[目的]本研究は細胞周期のリアルタイムイメージングを行うため、細胞周期特異的遺伝子であるp27^<Kip1>およびサイクリン遺伝子群に注目してその量的制御機構を解析する。さらにその知見を利用して細胞周期のリアルタイムイメージングを目指す。[研究成果]グリオブラストーマ細胞であるT98G細胞に血清飢餓かつ接触阻止を施し、GOに同調し、その後トリプシン処理で回収し、蒔き直しで10%血清を含む培地で細胞周期をG1期に進行させた。0時間から28時間まで3時間ごと経時的に細胞を回収し、細胞抽出液を調整し、ウエスタンプロットを行った。蛋白質発現の観察はp27^<Kip1>、サイクリンD1,サイクリンE、サイクリンA、サイクリンB、p53を対象として細胞周期における発現パターンを解析した。p27^<Kip1>はGO/G1において既に発現しているので転写より分解によって発現量が変動する。我々はp27^<Kip1>の新たなユビキチンリガーゼとしてPirh2を同定した。そこでp27^<Kip1>の分解に関与する既知のユビキチンリガーゼSkp2に加えPirh2の発現変動も解析対象に加えた。その結果、G1後期でサイクリンEが上昇、S期に開始と同時にサイクリンAが発現し、G2/MでサイクリンBが急増した。一方でp27^<Kip1>はG1期中期から減少し、それに対応してPirh2はG1期中期から徐々に発現が上昇した。Skp2の発現はS期から亢進することがわかった。p53はこの細胞では変異型のため細胞周期を通じて安定であった。これらの分子を追跡することで細胞周期のモニターが可能なことが判明した。一方でサイクリンD1のレポーターアッセイ系を構築し、サイクリンD1の細胞周期依存的転写を観察出来るようになった。

[Objective] This study aims to analyze the regulatory mechanism of cell cycle differentiation and cell cycle specific <Kip1>gene transfer. This knowledge is used to guide the development of cell cycles. [Results] T98G cells were treated with serum starvation, G1 phase, GO regulation, post-treatment, and 10% serum. Time 0:28:30 p.m. Cell recovery, cell extract adjustment, and cell recovery Protein development is observed in p27^<Kip1>, Scri D1, Scri E, Scri A, Scri B, p53, and analyzed in cell cycle. p27^<Kip1>GO/G1 is the first time that the amount of time spent in the process has changed. I'm sorry, but I'm sorry<Kip1>. The resolution of the p27^<Kip1>is related to the known transmission of the Skp2 and the occurrence of the Pirh2. As A result, G1 late stage On the other hand, p27 decreased in the middle of <Kip1>G1 and increased in Pirh2. Skp2 appears in the S phase. p53 cell cycle The molecular trace of the cell cycle is not known. A cell cycle dependent system of D1 is constructed and detected.