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発癌過程におけるコネキシン機能異常のメカニズム;細胞接着因子との相互依存性

癌变过程中连接蛋白功能障碍的机制；与细胞粘附因子的相互依赖性

基本信息

批准号：
16021254
负责人：
山崎洋
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Kwansei Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16021254/
关键词：
コネキシンギャップ結合がん抑制遺伝子カドヘリン

项目摘要

癌細胞の多くでコネキシンで構成されるギャップ結合を介した細胞間コミュニケーションの異常が見られる。しかし、発癌過程におけるギャップ結合異常の分子機構は未解明である。われわれは、コネキシンの細胞内輸送制御機構の異常が発癌メカニズムに関与していると考え、その解明が本研究の目的である。今年度までにコネキシン26(Cx26)の癌抑制作用の機序を研究するために、Cx26の細胞質内ループ部位と特異的に結合するAP26タンパクの遺伝子をクローニングした。さらに、このAP26遺伝子発現をRNAi法で阻害した細胞株を作製し、これらの細胞株ではCx26の局在が細胞膜から細胞質内へ移行し、ギャップ結合細胞間コミュニケーションが阻害され、軟寒天コロニー形成能が増強されることを明らかにした。今年度はさらに多くの細胞株でこれらの結果を確認した。また、Cx43の細胞内ループ部位をCx26のそれと入れ替えたキメラたんぱく質は細胞質内に局在するために、AP26によるCx26の局在性および機能の制御にはCx26全体が必要である可能性が示唆された。AP26がCx26との結合を確認するために、種々の条件下で免疫沈降させてみたが、共沈を確認することはできなかった。Cx26に対するAP26と同様に、Cx43の細胞質内ループ部位に特異的に結合するタンパクAP43の同定も継続している。候補遺伝子のひとつであるSemaphorin 3Fは、癌抑制遺伝子として報告されていることもあり、有力候補遺伝子と考えている。Cx26およびCx43の細胞質内ループ部位に変異を導入後、その挙動を調べ、ドミナントネガティブ効果を示すCx26変異体と機能喪失を伴うCx43変異体の選定ができた。

Cancer cells more than のくでコネキシンで constitute されるギャップ combining を interface した intercellular コミュニケーションの abnormal が see られる. The process of tumor occurrence におけるギャップ binding abnormality <s:1> molecular structure におけるギャップ unexplained である. われわれは, コネキシンの intracellular delivery system royal institution の abnormal が発 carcinoma メカニズムに masato and しているとえ test, その interpret がの purpose this study である. Our までにコネキシン 26 (Cx26) の carcinoma を inhibition の machine research するために, Cx26 の cytoplasm ルーと specific にプ parts combine する AP26 タンパクの posthumous son 伝をクローニングした. さらに, この AP26 posthumous son 伝発 now を RNAi method で resistance against したし, the cell lines を cropping これらの cell lines では Cx26 の bureau in が membrane から cytoplasm へ transitional し, ギャップ combination between cells コミュニケーションが resistance against され, soft sees コロニー can form strong が raised されることを Ming らかにした. The results of さらにさらに multiple く <s:1> cell lines で <s:1> れられらを this year を confirm たた. また, Cx43 の intracellular ループ parts を Cx26 のそれと into れ for えたキメラたんぱく qualitative は cytoplasm に bureau in するために, AP26 による Cx26 の bureau in the sexual および function の suppression には Cx26 all necessary でがあがる possibility in stopping された. AP26 が Cx26 との combining を confirm するために, kind of 々ので immune sink under the condition of させてみたが, shen を confirm することはできなかった. Cx26 にす seaborne る AP26 と with others に, Cx43 の cytoplasm ルーに specific にプ parts combine するタンパク AP43 の with fixed も継続している. Alternate heritage 伝 son のひとつである Semaphorin 3 f は, cancer inhibition but 伝として report されていることもあり, powerful backup but 伝と exam えている. The cytoplasm ル Cx26 および Cx43 のーにプ parts - different を after import, その挙 motion をべ, ドミナントネガティブ unseen fruit を shown す Cx26 - allograft function と lost を with う Cx43 - variant の selected ができた.