発癌過程におけるコネキシン機能異常のメカニズム;細胞接着因子との相互依存性

癌变过程中连接蛋白功能障碍的机制；与细胞粘附因子的相互依赖性

• 批准号: 15023256
• 负责人: 山崎 洋
• 金额: $ 2.82万
• 依托单位: Kwansei Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15023256/
• 关键词: コネキシン; ギャップ結合; がん抑制遺伝子; カドヘリン

発癌過程におけるギャップ結合細胞間コミュニケーション異常の原因の多くはコネキシンの細胞内局在性の異常にあることをすでに明らかにした。これまでの結果からコネキシンの細胞内局在性の制御メカニズムとして、コネキシンに特異的に結合するタンパクの存在を仮定した。そこで、酵母のTwo-Hybrid法で、コネキシンと特異的に結合するタンパクの検索をはじめ、Cx26の細胞内ループにあたる部分をBaitにしてHeLa細胞のcDNAライブラリーから結合タンパクの候補遺伝子AP26をクローニングした。今年度は2種類のアプローチでAP26の発現・機能を安定的に阻害している細胞株を樹立してAP26の機能解明を行った。HeLa細胞にCx26を発現させたHeLaCx26細胞にRNAiを安定的に発現させた細胞株を作製しAP26発現を阻害すると、Cx26が細胞膜から移行してギャップ結合コミュニケーションが低下することが明らかになった。さらに、AP26の発現阻害が細胞増殖へ及ばす影響を足場依存性を指標に調べたところ足場依存性が増加した。AP26の機能を阻害するためにCx26の細胞質内ループ部位だけを強制発現させた。AP26はCx26の細胞質内ループ部位をベイトにして同定しており、この部位を大量に発現させるとAP26がトラップされることにより、結果的にAP26の機能が阻害されるはずである。そのような細胞株を調べると、期待していたようにCx26の細胞膜から細胞質内への移行、ギャップ結合細胞間コミュニケーションの減少、軟寒天中での増殖能の強化、ヌードマウスでの造腫瘍性の増加、が見られた。これらの結果はAP26がCx26のギャップ結合能および癌抑制作用の制御にかかわっていることを示唆する。

The development process of cancer is characterized by a combination of cellular and intracellular abnormalities. As a result of this, the existence of intracellular regulatory mechanisms for the development of novel proteins is determined. In addition, the yeast Two-Hybrid method can be used to combine the cDNA of HeLa cells with the cDNA of Cx26. This year, two types of cell lines were established and AP26 was identified. HeLa Cx26 cells were detected by RNAi, and Cx26 cells were detected by RNAi. In addition, AP26 's development resistance to cell proliferation and its impact on the field dependence index has increased. The function of AP26 is inhibited by stress in the cytoplasm of Cx26. AP26 is the same as Cx26 in the cytoplasmic position, and this position appears in large quantities. As a result, the function of AP26 is blocked. The cell membrane of Cx26 was transferred to the cytoplasm, the cell membrane of Cx26 was transferred to the cytoplasm, and the cell membrane of Cx26 was transferred to the cytoplasm. The results showed that AP26 and Cx26 could bind to each other and inhibit cancer growth.

项目成果

Zienolddiny S, Aguelon AM, Mironov N, Mathew B, Thomas G, Sankaranarayanan R, Yamasaki H.: "Genomic instability in oral squamous cell carcinoma : relationship to betel-quid chewing."Oral Oncol. 40. 298-303 (2004)

Zienolddiny S、Aguelon AM、Mironov N、Mathew B、Thomas G、Sankaranarayanan R、Yamasaki H.：“口腔鳞状细胞癌的基因组不稳定性：与咀嚼槟榔的关系。”口腔肿瘤。

Upham BL, Suzuki J, Chen G, Wang Y, McCabe LR, Chang CC, Krutovskikh VA, Yamasaki H, Trosko JE.: "Reduced gap junctional intercellular communication and altered biological effects in mouse osteoblast and rat liver oval cell lines transfected with dominant

Upham BL、Suzuki J、Chen G、Wang Y、McCabe LR、Chang CC、Krutovskikh VA、Yamasaki H、Trosko JE.：“转染优势蛋白的小鼠成骨细胞和大鼠肝卵圆细胞系中间隙连接细胞间通讯减少并改变了生物效应

Saito T, Tanaka R, Wataba K, Kudo R, Yamasaki H.: "Overexpression of Estrogen Receptor-α Gene Suppresses Gap Junctional Intercellular Communication in Endometrial Carcinoma Cells"Oncogene. 23. 1109-1116 (2003)

Saito T、Tanaka R、Wataba K、Kudo R、Yamasaki H.：“雌激素受体-α 基因的过度表达抑制子宫内膜癌细胞中的间隙连接细胞间通讯”Oncogene。

Yano T, Ito F, Satoh H, Hagiwara K, Nakazawa H, Toma H, Yamasaki H.: "Tumor-suppressive effect of connexin 32 in renal cell carcinoma from maintenance hemodialysis patients"Kidney Int. 63. 381-381 (2003)

Yano T、Ito F、Satoh H、Hagiwara K、Nakazawa H、Toma H、Yamasaki H.：“连接蛋白 32 对维持性血液透析患者肾细胞癌的肿瘤抑制作用”Kidney Int。

Saito T, Nishimura M, Yamasaki H, Kudo R.: "Hypermethylation in promoter region of E-cadherin gene is associated with tumor dedifferention and myometrial invasion in endometrial carcinoma"Cancer. 97. 1002-1009 (2003)

Saito T、Nishimura M、Yamasaki H、Kudo R.：“E-钙粘蛋白基因启动子区域的高甲基化与子宫内膜癌的肿瘤去分化和肌层浸润有关”癌症。