抗腫瘍性アポトーシス誘導型RNAヘプタマーによる個体レベルでのがん治療法の開発

使用抗肿瘤细胞凋亡诱导 RNA 七聚体开发个体水平的癌症治疗

• 批准号: 16023202
• 负责人: 田村 正人
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16023202/
• 关键词: tRNaseZ; tRNA; ヘプタマー; 遺伝子発現; がん治療; 遺伝子治療

tRNA前駆体の3'トレーラー切断酵素(tRNaseZ)と,短いガイドRNA(sgRNA)を用いて,細胞内mRNAを塩基配列特異的に切断するRNA切断法を,研究代表者らは見出し報告してきた.本研究は,この新たな遺伝子発現制御法を個体レベルに応用し,抗腫瘍性RNAヘプタマー分子(sgRNAの一種)を開発して有効ながん治療法として実用化を目指するものである.まず,tRNase Zが,新しいタイプのsgRNAであるhook RNAの存在下で4-7 base RNA cutterとして機能しうるという発見がなされ,これと同等の構造をとりうる一部のmiRNAがhook RNAとして機能しうる可能性が考えられた.哺乳動物細胞において,実際にtRNase ZがmRNAを切断していることをより厳密に証明するために,テトラサイクリン存在下でtRNaseZを過剰発現する293細胞を樹立した.northern blotならびにwestern blotにより,tRNase Zの発現増加が確認された.この細胞において,標的RNAと塩基対合しうるsgRNAによって,ルシフェラーゼ活性の抑制効果が増大するか検討したところ,その効果は有意に増加した.この結果は細胞内においてtRNase ZによってmRNAの切断が引き起こされていることを証明するものである.また,Sarcoma180細胞においてアポトーシスを増加させたRNAヘプタマーBclHepを種々の濃度でDoxorubicinと併用し,MM6乳癌細胞をC3H/Heマウスに移植した固形癌担癌マウスの腫瘍局部に導入し,腫瘍径ならびに腫瘍重量を測定した.本研究から,tRNase Zならびにhook RNAを使用する遺伝子発現抑制法をがん治療に応用しうると考えられた.

TRNA 駆 body の before 3 'ト レ ー ラ ー cut enzyme (tRNaseZ) と, short い ガ イ ド RNA (sgRNA) を い て, intracellular mRNA を salt base with column specific に cut す る RNA を cut method, research representatives ら は report shows し し て き た. This study は こ の new た な heritage 伝 son 発 suppression method now を individual レ ベ ル に 応 し, resistance to swollen sores sex RNA ヘ プ タ マ ー molecules (sgRNA の) を open 発 し て have sharper な が ん therapy と し て be in turn を refers す る も の で あ る. ま ず, tRNase Z が, new し い タ イ プ の sgRNA で あ る hook The presence of RNA の で 4-7 base RNA cutter と し て function し う る と い う 発 see が な さ れ, こ れ と equal の tectonic を と り う る a の micrornas が hook RNA と し て function し う る possibility が exam え ら れ た. Mammalian cells に お い て, be actually に tRNase Z が mRNA を cut し て い る こ と を よ り 厳 dense に prove す る た め に, テ ト ラ サ イ ク リ ン presence で tRNaseZ を before turning 発 now す る を 293 cells establish し た. Northern blot な ら び に western Blot に よ り, tRNase Z の 発 now rights が confirm さ れ た. こ の cells に お い て, target RNA と salt base us seaborne し う る sgRNA に よ っ て, ル シ フ ェ ラ ー ゼ inhibition unseen の fruit が raised large す る か beg し 検 た と こ ろ, そ の unseen fruit は intentionally に raised plus し た. こ の results は intracellular に お い て tRNase Z に よ っ て mRNA の cut が lead き up こ さ れ て い る こ と を prove す る も の で あ る. ま た, Sarcoma180 cells に お い て ア ポ ト ー シ ス を raised plus さ せ た RNA ヘ プ タ マ ー BclHep を kind 々 の concentration で Doxorubicin と and し MM6 breast cancer cells を C3H/He マ ウ ス Youdaoplaceholder0 transplantation of the lesion た in the case of solid carcinoma, ウス in the lesion of the tumor, local に of the tumor, introduction of the lesion に, tumor diameter ならびに, tumor weight を, determination of the lesion た. This study か ら, tRNase Z な ら び に hook use RNA を す る posthumous son 伝 発 inhibition method now を が ん treatment に 応 with し う る と exam え ら れ た.

项目成果

Regulation of mRNA expression of matrix extracellular phosphoglycoprotein (MEPE)/ osteoblast/osteocyte factor 45 (OF45) by fibroblast growth factor 2 in cultures of rat bone marrow-derived osteoblastic cells.

在大鼠骨髓源性成骨细胞培养物中，成纤维细胞生长因子 2 对基质细胞外磷酸糖蛋白 (MEPE)/成骨细胞/骨细胞因子 45 (OF45) mRNA 表达的调节。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Endocrine. 24
• 作者: Zhang;G.X.
• 通讯作者: G.X.

A novel 4-base-recognizing RNA cutter that can remove the single 3' terminal nucleotides from RNA molecules.

一种新型 4 碱基识别 RNA 切割器，可以去除 RNA 分子中的单个 3 末端核苷酸。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Nucleic Acids Res. 32
• 作者: Wang;JQ.;Kon;J.;Mogi;C.;Tobo;M.;Damirin;A.;Sato;K.;Komachi;M.;Malchinkhuu;E.;Murata;N.;Kimura;T.;Kuwabara;A.;Wakamatsu;K.;Koizumi;T.;Uede;T.;Tsujimoto;G.;Kurose;H.;Sato;T.;Harada;A.;Misawa;N.;Tomura;H.;Okajima;F.;Takaku H
• 通讯作者: Takaku H

Inhibition of HIV-1 gene expression by retroviral vector-mediated small-guide RNAs that direct specific RNA cleavage by tRNase ZL

• DOI: 10.1093/nar/gki164
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: NUCLEIC ACIDS RESEARCH
• 影响因子: 14.9
• 作者: Habu, Y;Miyano-Kurosaki, N;Takaku, H
• 通讯作者: Takaku, H

Hepatocyte growth factor/scatter factor stimulates migration of muscle precursors in developing mouse tongue

• DOI: 10.1002/jcp.20056
• 发表时间: 2004-11-01
• 期刊: JOURNAL OF CELLULAR PHYSIOLOGY
• 影响因子: 5.6
• 作者: Bandow, K;Ohnishi, T;Daikuhara, Y
• 通讯作者: Daikuhara, Y

A novel endonucleolytic mechanism to generate the CCA 3′ termini of tRNA molecules in Thermotoga maritima

• DOI: 10.1074/jbc.m313951200
• 发表时间: 2004-04-09
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Minagawa, A;Takaku, H;Nashimoto, M
• 通讯作者: Nashimoto, M