オステオカルシン遺伝子プロモーターのE-boxに結合するHLH型転写因子の研究

骨钙素基因启动子E盒结合HLH型转录因子的研究

• 批准号: 06771623
• 负责人: 田村 正人
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771623/
• 关键词: 骨芽細胞; オステオカルシン; 転写因子

ヘリックス-ループ-ヘリックス(HLH)型因子は,核内で転写制御を介して細胞の分化方向の決定を行う例が知られている.骨芽細胞分化においても,これら因子の関与が推測されたが,その本体は明らかにされていなかった.本研究では,骨芽細胞で特異的に産生されるオステオカルシン(OC)遺伝子のプロモーターに着目し,以下の結果を得た.(1)ld-1の発現ベクターをROS17/2.8細胞にトランスフェクトすると,OCのプロモーター活性が低下することを見いだし,種々の変異を用いた解析よりldに応答するE-boxを含む領域OCE1を同定した.(2)ゲルシフトアッセイよりROS17/2.8細胞の核抽出物にはOCE1に特異的に結合するタンパクが存在し,GST-ld-1タンパクの添加によりこの結合が減少した.μE5+μE2のオリゴヌクレオチドを加えても競合は見られず,E12/E47とは異なる因子の結合が示唆された.(3)OCE1への結合はC3H10T1/2細胞の核抽出物では見られないが,rhBMP-2処理で骨芽細胞への分化に伴い,OCE1への結合が観察された.(4)OCE2,3ならびに4のオリゴヌクレオチドを過剰に加えても競合は見られなかった.(5)DNaselフットプリント法から,OCE1部位におけるDNA-タンパク相互作用の存在が考えられた.(6)OCE1配列に結合するタンパクが,遺伝子産物として存在していることがサウスウエスタン法によって明らかとなった.本研究により,OC遺伝子の骨芽細胞における発現にはプロモーターのOCE1配列を認識する因子が寄与していることを明らかにすることができた.おそらくこの因子は,骨芽細胞の分化に関与するHLH型転写因子群の少なくともその一つと考えられ,今後骨芽細胞の分化や骨形成の機構を解明していく上で極めて重要であると考えられた.

HLH type factors regulate cell differentiation in the nucleus and mediate cell differentiation. Bone bud cell differentiation is a process of differentiation, which is related to factors and postulates, and the body is a process of differentiation. In this study, the specific production of osteoblast cells was investigated. The following results were obtained. (1)ld-1 was detected in ROS17/2.8 cells,OC activity decreased, species diversity was analyzed, ld-1 was detected in E-box containing OCE1, and OCE1 was determined. (2)OCE1-specific binding to nuclear extracts of ROS17/2.8 cells was present, but GST-ld-1 binding was reduced by addition of OCE1-specific binding to nuclear extracts.μE5+μE2 is a mixture of two different factors: E12/E47 and E12/E47. (3) OCE1 binding was observed in nuclear extracts of C3H10T1/2 cells,rhBMP-2 treatment was observed in differentiation of bone bud cells, and OCE1 binding was observed. (4)OCE2,3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 1 (5) DNA-DNA interaction at OCE1 site. (6)OCE1 alignment is not only the combination of the two, but also the existence of the product. In this study, the development of OC gene in bone bud cells was studied. A study of the factors involved in differentiation of bone bud cells and HLH-type transcription factors reveals the importance of these factors in understanding the mechanisms underlying bone bud differentiation and bone formation.

项目成果

田村正人: "Identification of a DNA sequence involved in Osteoblast-specific gene expression via interaction with helix-loop-helix(HLH)-type transcription factors" Journal of Cell Biology. 126. 773-782 (1994)

Masato Tamura：“通过与螺旋-环-螺旋 (HLH) 型转录因子相互作用鉴定参与成骨细胞特异性基因表达的 DNA 序列”《细胞生物学杂志》126. 773-782 (1994)。

田村正人: "Primary structure of bovine interstitial collagenese deduced from C DNA sequence" DNA sequence. 5. 63-66 (1994)

Masato Tamura：“从 C DNA 序列推导出的牛间质胶原蛋白的一级结构”DNA 序列。

田村正人: "1α,25-dihydroxyvitamin D3 down -regulated pleiotrophin messenger RNA expression in osteoblast-like cells" Endocrine. 3. 21-24 (1995)

Masato Tamura：“1α,25-二羟基维生素 D3 下调成骨细胞样细胞中的多效蛋白信使 RNA 表达”内分泌。 3. 21-24 (1995)