オステオカルシン遺伝子の骨芽細胞特異的発現に関与するHLH型転写因子の構造と機能

参与骨钙素基因成骨细胞特异性表达的HLH型转录因子的结构和功能

• 批准号: 07771652
• 负责人: 田村 正人
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771652/
• 关键词: 骨芽細胞; オステオカルシン; 転写因子

ヘリックス‐ループ‐ヘリックス(HLH)型転写因子は,核内で転写制御を介して細胞の分化方向の決定を行う例が知られている.骨芽細胞の分化においても,これら因子が関与していることをすでに,本研究代表者は明らかにしてきた.本研究では,^<32>Pでラベルしたオステオカルシン遺伝子のE-box(OCE1)の二本鎖オリゴヌケレオチドをプローブにしてサウスウエスタン法によるスクリーニングを行った.まずROS17/2.8細胞やMC3T3E1細胞等の骨芽細胞様細胞のλgt11cDNAライブラリーを作製した.これらのcDNAライブラリーを用い、IPTGで融合タンパクを発現させプローブと結合させた.この方法によりいくつかのクローンが得られた.これらのクローンはプラスミドベクターにサブクローニング後,ジデオキシ法により塩基配列を決定した.また塩基配列より,アミノ酸配列に翻訳しタンパクの一次構造を決定し,コンピューターを用いタンパク質データベースで既知の転写因子との構造上の類似性を検討するとともに,種々のソフトウエアを用い構造に関する解析を行った.さらに,OCE1へ結合するタンパクについて,サウスウエスタン法によりその結合を検討した.すなわち,ROS17/2.8細胞,BMP‐2処理したC3H10T1/2細胞の核抽出液を未変性ポリアクリルアミド電気泳動し,ニトロセルロースメンブレンに転写した.^<32>PでOCE1オリゴヌクレオチドを標識し,これをプローブとして,結合させた.およそ,50Kd付近に,OCE1に特異的に結合するバンドが観察された.本研究により,OCE1に結合する因子を明らかにすることができた.この因子は,骨芽細胞の分化に深く関わっているものと考えられ,今後骨芽細胞の分化や骨形成の機構を解明していく上で極めて重要であると考えられた.

ヘ リ ッ ク ス ‐ ル ー プ ‐ ヘ リ ッ ク ス (HLH) planning factor は, intranuclear で planning write suppression を interface し て cells の way の decided line を う example が know ら れ て い る. Bone bud cells の に お い て も, こ れ ら factor が masato and し て い る こ と を す で に, this study represent は Ming ら か に し て き た. This study で は, ^ < > 32 P で ラ ベ ル し た オ ス テ オ カ ル シ ン heritage 伝 son の E - box (OCE1) の 2 lock オ リ ゴ ヌ ケ レ オ チ ド を プ ロ ー ブ に し て サ ウ ス ウ エ ス タ ン method に よ る ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. ま ず ROS17/2.8 cell や MC3T3E1 の bone others in bud cells such as cell の lambda Gt11cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を cropping し た. こ れ ら の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を い, IPTG で fusion タ ン パ ク を 発 now さ せ プ ロ ー ブ と combining さ せ た. こ の way に よ り い く つ か の ク ロ ー ン が have ら れ た. こ れ ら の ク ロ ー ン は プ ラ ス ミ ド ベ ク タ ー に サ ブ ク ロ ー ニ ン グ after ジ デ オ キ シ method に よ り salt base with column を decided し た. ま た salt column base with よ り, ア ミ ノ acid with column に turn 訳 し タ ン パ ク の を し decision, a structure コ ン ピ ュ ー タ ー を with い タ ン パ ク qualitative デ ー タ ベ ー ス で already know の planning write factor と の structure on の similarity を beg す 検 る と と も に, kind of 々 の ソ フ ト ウ エ ア を using い construct に masato す る parsing line を っ た . さ ら に, OCE1 へ combining す る タ ン パ ク に つ い て, サ ウ ス ウ エ ス タ ン method に よ り そ の combining を beg し 検 た. す な わ ち, ROS17/2.8 cells, BMP ‐ 2 処 Richard し た C3H10T1 の / 2 cell nuclear extract を not - sex ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド 気 swimming し, ニ ト ロ セ ル ロ ー ス メ ン ブ レ ン に Planning to write し た. ^ < > 32 P で OCE1 オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を し logo こ れ を プ ロ ー ブ と し て, combining さ せ た. お よ そ, pay nearly 50 kd に, OCE1 に specific に combining す る バ ン ド が 観 examine さ れ た. This study に よ り, OCE1 に combining す る factor を Ming ら か に す る こ と が で き た. こ は の factor, deep bone bud cells の に く masato わ っ て い る も の と exam え ら れ, future bone bud cells の や bone formation の institutions を interpret し て い で extremely on く め て important で あ る と exam え ら れ た.

项目成果

長岡成孝: "Interleukin-8 gene expressin by human dental pulp fibroblast in cultures stimulated with Prerotella intermedia Lypopolysaccaride" Journal of Endodontics. 22. 9-12 (1996)

Shigetaka Nagaoka：“在用中间普雷罗氏菌脂多糖刺激的培养物中人牙髓成纤维细胞表达白细胞介素 8 基因”《牙髓学杂志》22. 9-12 (1996)。

田村正人: "1α,25-dihydroxyvitamin D3 down -regulated pleiotrophin messenger RNA expression in osteoblast-like cells" Endocrine. 3. 21-24 (1995)

Masato Tamura：“1α,25-二羟基维生素 D3 下调成骨细胞样细胞中的多效蛋白信使 RNA 表达”内分泌。 3. 21-24 (1995)

田村正人: "Interleukin-1α stimulates interstitial collagenase gene expression in human dental pulp fibroblast" Journal of Endodontics. (印刷中). (1996)

Masato Tamura：“Interleukin-1α 刺激人牙髓成纤维细胞中的间质胶原酶基因表达”《牙髓学杂志》（出版中）。