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特異的タンパク質ノックダウン法を用いた細胞外基質と骨形成シグナルの相互作用の解析

特異的タンパク質ノックダウン法を用いた細胞外基質と骨形成シグナルの相互作用の解析
使用特定蛋白敲低方法分析细胞外基质与成骨信号之间的相互作用
批准号：
15659441
负责人：
田村 正人
金额：
$1.98万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2003 至 2004
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659441/
关键词：
骨芽細胞骨形成細胞外基質ノックダウン

项目摘要

项目成果

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マウス筋芽細胞であるC2C12細胞を培養し本研究に用いた.この細胞にBMP2を加えて培養するとアルカリフォスファターゼ(ALP)活性が増加するとともに,骨芽細胞に特異的なオステオカルシンの発現が誘導され,骨芽細胞へ分化しうる.ノーザンプロット法を用い細胞接着因子のmRNA発現を検討したところ,E-カドヘリンならびにα5 integrinの発現が見られた.カドヘリンの細胞内裏打ちタンパク質であるβ-cateninはLef/Tcf1と結合してDNAに結合し転写調節の機能も有している.そこで,Lef/Tcf1応答領域レポーター(pTOP-FLASH)をC2C12細胞にトランスフェクトした.GSK-3によるリン酸化部位を欠失させた活性型β-cateninもしくはWnt3aを導入すると,pTOP-FLASHの活性は増大した.他方,non-canonical WntであるWnt-5aによっては,その活性は増加しなかった.Wnt3aと同時にBMP2を添加したところ,その活性は低下した.これらの結果から,C2C12細胞においてもWntのcanonical経路が存在しBMP2はこれに抑制的に機能することがわかった.RNAiを用いたノックダウンを行うために,α5 integrin等のインテグリンやGSK3βの一部のmRNA配列相当の合成ヌクレオチドをU6プロモーターベクターに挿入したコンストラクトを作製した.このプラスミドをC2C12細胞にトランスフェクトさせノックダウンを行い,機能解析を行ったところ,ALP活性,オステオカルシンmRNA発現の減少ならびにId1遺伝子のBMP2応答領域に対する反応性が低下し,骨芽細胞への分化が抑制された,これらの結果からインテグリンからのシグナルはβ-cateninを介して骨芽細胞分化を制御していることが明らかとなった.
期刊论文(24)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Hepatocyte growth factor/scatter factor stimulates migration of muscle precursors in developing mouse tongue
DOI： 10.1002/jcp.20056
发表时间： 2004-11-01
期刊： JOURNAL OF CELLULAR PHYSIOLOGY
影响因子： 5.6
作者： [Bandow, K, Ohnishi, T, Daikuhara, Y]
通讯作者： Daikuhara, Y
Periodontal ligament cells under intermittent tensile stress regulate mRNA expression of osteoprotegerin and tissue inhibitor of matrix metalloprotease-1 and -2
DOI： 10.1007/s00774-003-0456-0
发表时间： 2004-04
期刊： Journal of Bone and Mineral Metabolism
影响因子： 3.3
作者： [K. Tsuji;Keiji Uno;Gui-xia Zhang;M. Tamura]
通讯作者： K. Tsuji;Keiji Uno;Gui-xia Zhang;M. Tamura
Extracellular Inorganic Phosphate Regulates Glvr-2 Phosphate Transporter/Retrovirus Receptor mRNA Expression In Rat Bone Marrow Stromal Cells.
细胞外无机磷酸调节大鼠骨髓基质细胞中 Glvr-2 磷酸转运蛋白/逆转录病毒受体 mRNA 表达。
DOI： --
发表时间： 2004
期刊： J.Cell Physiol. 198
影响因子： --
作者： [Wada, K.]
通讯作者： K.
Bandow, K.: "Hepatocyte growth factor/scatter factor stimulates migration of muscle precursors in developing mouse tongue."J.Cell Physiol.. (印刷中). (2004)
Bandow, K.：“肝细胞生长因子/分散因子刺激发育中的小鼠舌头中的肌肉前体的迁移。”J.Cell Physiol..（印刷中）。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 12 条
    骨芽細胞が産生する新規SLRPを介した脂肪細胞分化・脂質代謝の制御機構の解明
    • 批准号：
      20K09875
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
    • 资助金额：
      $2.75万
    • 财政年份：
      2020
    • 负责人：
      田村 正人
    • 依托单位：
      Hokkaido University
    骨と脂肪組織の臓器間クロストークに関わる分子とその調節機構の解明
    • 批准号：
      26462807
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
    • 资助金额：
      $3.16万
    • 财政年份：
      2014
    • 负责人：
      田村 正人
    • 依托单位：
      Hokkaido University
    TRUEジーンサイレンシング法によるマイクロRNA制御による骨形成誘導法の開発
    • 批准号：
      20659288
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
    • 资助金额：
      $1.98万
    • 财政年份：
      2008
    • 负责人：
      田村 正人
    • 依托单位：
      Hokkaido University
    sgRNAを用いた新規骨形成誘導法の開発
    • 批准号：
      18659547
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.11万
    • 财政年份：
      2006
    • 负责人：
      田村 正人
    • 依托单位：
      Hokkaido University
    国内基金
    海外基金
    THUMPD1通过影响USP4的泛素化调控TGF-β/BMP信号通路对骨形成的作用及机制研究
    • 批准号：
      2026JJ80373
    • 项目类别：
      省市级项目
    • 资助金额：
      --
    • 批准年份：
      2026
    • 负责人：
      王湘斌
    • 依托单位：
      邵阳市中心医院
    新蛋白MTRP介导的线粒体转移在强直性 脊柱炎病理新骨形成中的作用与机制研 究
    • 批准号：
    • 项目类别：
      省市级项目
    • 资助金额：
      10.0万元
    • 批准年份：
      2025
    • 负责人：
      李梓濠
    • 依托单位：
      中山大学
    circAMBRA1下调介导BMSC自噬减弱在糖 皮质激素性骨质疏松症骨形成减少中的 作用和机制研究
    • 批准号：
    • 项目类别：
      省市级项目
    • 资助金额：
      10.0万元
    • 批准年份：
      2025
    • 负责人：
      旺姗
    • 依托单位：
      中山大学
    健骨方活性成分维持骨吸收-骨形成偶联 的作用靶点及调控机制研究