発生における転写因子MsxのBMP4へのポジティブフィードバック機構とその役割

发育中转录因子Msx对BMP4的正反馈机制及其作用

• 批准号: 16027217
• 负责人: 里方 一郎
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16027217/
• 关键词: Msx; BMP4; ポジティブフィードバック; Msx1; Msx2; Bmp4; ポジテイブフイードバック

(1)Msx1,Msx2によるBMP4へのポジティブフィードバック機構の発生における役割を個体レベルでの解明、(2)Msx1,Msx2により発現調節を受けるBmp4のcis-DNA領域の同定および同部に結合する転写因子Xの単離を計画した。Msx2 promoter-Bmp4トランスジェニックマウスをMsxノックアウトマウスと交配し、ノックアウトマウスの表現型がレスキューされるか調べた。Msx2-/-;tg/tgマウスでは、Msx2-/-マウスに生じる歯の発生異常、歯原性嚢胞、骨形成異常はほぼレスキューされた。この結果は、歯の発生、骨形成には、Msx2は局所のBMP4の発現増幅という役割のみを果たしていることが考えられた。Msx1,Msx2ダブルノックアウトマウスのレスキュー実験においても、多くの器官形成においてMsxは局所のBMP4の発現増幅という役割のみを果たしていることが考えられた。Bmp4の上流領域をluciferase遺伝子につないだプラスミドを作成した。これらのプラスミドをC2C12細胞に、CAG-Msx1,CAG-Msx2プラスミドとともにco-transfectionし、どの領域にMsx1,Msx2により発現調節を受けるBmp4のcis-DNA領域が存在するのか調べた。いずれの細胞株においても、Msx1,Msx2ともにBmp4の転写開始点から上流4.0kbから4.1kbの領域にBmp4を発現促進する領域を見出した。この領域の中に、C2C12細胞の核蛋白を用いたEMSAおよびfoot printingにより、転写因子Xが結合すると考えられるDNA領域を特定した。転写因子Xを同定するために発現ライブラリーをスクリーニングし、候補を1つ見い出した。

(1) An individual explanation of the development of the BMP4-level supporting mechanism in Msx1 and Msx2, and (2) a separate design factor X that combines the identity and identity of BMP4 in the cis-DNA field with the identity of BMP4 in Msx1 and Msx2. Msx2 promoter-Bmp4 $> Msx2-/-;tg/tg The result is that Msx2 has a higher growth rate than BMP4 and a lower growth rate than BMP 4. Msx1,Msx2, Msx 1, Msx 2, Msx 2, Msx 3, Msx 4, Msx 5, Msx 6, Msx 7, Msx 8, Msx 9, Msx 10, Msx 10, Msx 11, Msx 12, Msx 13, Msx 14, Msx 15, Msx 16, Msx 17, Msx 18, Msx 19, Msx 10, Msx 11, Msx 10, Msx 10, M Bmp4 upper stream luciferase gene The presence of cis-DNA domain in C2C12 cells, CAG-Msx1,CAG-Msx 2, and co-transfection, and in Msx1,Msx2, and Bmp4, which regulate the expression of C2C12 cells. In the middle of the cell line, Msx1,Msx 2 and Bmp4 were found in the field of Bmp4 expression promotion from 4.0kb to 4.1kb. In this domain, C2C12 cell nuclear protein is used in EMSA and foot printing, and factor X is used in DNA domain specific. The writing factor X is constant, and the candidate is 1.