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ノックアウトマウスを用いたホメオテック遺伝子の標的遺伝子の同定

使用敲除小鼠鉴定同源技术基因的靶基因

基本信息

批准号：
07260208
负责人：
里方一郎
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07260208/
关键词：
Msx1 Msx2 Bmp4 Lef1 MyoD Syndecan Hoxa10

项目摘要

私たちがこれまでに作成したホメオテイック遺伝子Msx1、Msx2、Hoxa10のノックアウトマウスを用いて、これらの遺伝子の標的遺伝子ないし下流遺伝子の同定を試みた。胎生12.5日から生直後のMsx1欠損マウスの臼歯の形成過程について、増殖因子Bmp4の発現をin situ hyridizationにより経時的に調べたところ、歯上皮のBmp4の発現は、野生型と同じように胎生12.5日頃より認められたが、直下の歯間葉での発現は全経過を通して全く認められなかった。一方、野生型の歯間葉でのBmp4の発現は、Msx1の発現が認められるようになる胎生13.0頃より認められた。また、最近報告された転写因子Lef1のノックアウトマウスの歯の発生異常が、Msx1欠損マウスの異常と全く同じであったことより、Msx1欠損マウスにおけるLef1の発現を調べたところ、野生型とは異なり、歯間葉での発現は全経過を通して全く認められなかった。Lef1欠損マウスの歯間葉でのMsx1の発現は、正常であった。in vitroでMsx1欠損マウスの歯間葉を培養し、ビーズにBMP4を付けて植え込むとLef1の発現を誘導できた。以上の実験結果より、歯の発生においては、最初に歯上皮からBMP4が放出され、このシグナルにより直下の歯間葉において、Msx1の発現が誘導され、このMsx1が、直接あるいは間接的にBmp4の発現を誘導し、産生されたBMP4がLef1の発現を誘導する、すなわち、歯上皮Bmp4→歯間葉Msx1→Bmp4→Lef1というシグナル経路が存在し、この経路により歯が形成されることが明らかにされた。毛嚢、乳腺の形成においても、上皮Bmp4→間葉Msx1およびMsx2→Bmp4→Lef1という、ほぼ、歯と同じシグナル経路が重要な役割を果たしていることが明らかにされた。さらに、肢芽においても、上皮(頂堤)Bmp4→間葉(進行帯)Msx1およびMsx2→Bmp4という共通の経路の存在が発見された。Msx1およびMsx2は、この他に、心内膜床、妊娠子宮、下垂体などの上皮-間葉相互作用が認められる組織で発現しており、上述したシグナル経路と共通の経路が、各器官形成に際して機能していることが推測される。in situ hybridizationによるMsx1およびMsx2の下流遺伝子の探索では、この他に、体節Msx→MyoD、歯間葉Msx1→Syndecanの経路が明らかにされた(Cell投稿準備中)。Msx1、Msx2、Hoxa10のsubtractionあるいはPCR differential displayによる標的遺伝子ないし下流遺伝子の同定の試みについては、いくつかのクローンを単離した段階であり、現在、欠損マウスのRNAを用いたRNAse protection assayなどにより、確認の実験を行っているところである。今後、陽性クローンについて塩基配列の決定を行い、研究を進めていく予定である。

This is the first time that a file has been created. The file is Msx1, Msx2 and Hoxa10. The development of Msx1 deficiency and Bmp4 in site hybridization during tooth formation at 12.5 days after birth, and the development of Bmp4 in tooth epithelium at 12.5 days after birth. Bmp4 and Msx1 were detected in the interdental leaves of the wild type. Recently reported, the occurrence of Lef1 in the absence of loss is abnormal, Msx1 in the absence of loss is abnormal, Msx1 in the absence of loss is abnormal, Lef1 in the absence of loss is abnormal, wild-type Lef1 in the absence of loss is abnormal, and the occurrence of interleaf is abnormal. The occurrence of Msx1 in the absence of damage to the tooth is normal. In vitro, Msx1 is deficient in the development of BMP4. The results showed that BMP4 was released from the initial dental epithelium, BMP4 was released from the lower dental epithelium, Msx1 was induced directly, BMP4 was induced indirectly, BMP4 was induced from the lower dental epithelium, BMP4 was induced from the lower dental epithelium, BMP4 was induced from the lower dental epithelium, BMP4 was induced from the lower dental epithelium, and BMP4 was induced from the lower dental epithelium. This is the first time I've ever seen a woman. In the formation of hair and breast, epithelial cells Bmp4→ mesenchymal cells Msx1 → Msx2→Bmp4→Lef1 →The existence of a common pathway is found in the middle of the bud, epithelium (apex)Bmp4→ septa (progress)Msx1 → Msx2→Bmp4→ middle. Msx1 and Msx2 are related to the development of tissue, the common pathway, the function of organ formation, and the epithelial-mesenchymal interaction between the endocardial bed, pregnant uterus, and pituitary gland. In situ hybridization, Msx1 and Msx2 are explored in the downstream pathway of the cell. The pathway of Msx→MyoD and Msx1→Syndecan is in preparation for Cell submission. Msx1, Msx2, Hoxa10 and their subtractions are PCR differential display, target DNA, downstream DNA, and the same test. They are PCR differential display, RNA differential display, RNAse protection assay, and confirmation. In the future, the determination of the base alignment of the positive and negative factors will be carried out and the research will be carried out.