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ノックアウトマウスを用いたホメオティック遺伝子の機能の解析

使用敲除小鼠分析同源基因功能

基本信息

批准号：
08252204
负责人：
里方一郎
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08252204/
关键词：
Msx1 Msx2 Msx3 Hoxa10 ノックアウトマウス

项目摘要

1.Msx3ノックアウトマウスの作成約13kbのMsx3のゲノム遺伝子フラグメントを用いてtargeting vectorを作成した。当初、ホメオボックスを有するexon2を含む3kbのフラグメントを除いたtargeting vectorを用い、G418とGANCによるpositive-negative selectionを行ったが、homologous recombinantは得られなかった。そこで、ホメオボックスを含む1.8kbのフラグメントを除いたtargeting vectorに作成し直したところ、個数のhomologous recombinantsが得られた。これらのhomologous recombinantsをBALB/cおよびC57BL/6マウスのblastocystにmicroinjectionし、キメラマウスを作成した。現在、成体に成長するのを待っているところで、今後、germline transmissionしたキメラマウスを野生型マウスと交配することにより、ヘテロ接合体およびホモ接合体を得る予定である。2.Msx2とアポトーシスMsx2ノックアウトマウスでは、歯上皮の発生異常が生じた。TUNEL法を用いて歯の発生過程でのアポトーシスを調べたところ、Msx2ノックアウトマウスでは、野生型で認められる歯上皮でのアポトーシスが全く認められなかった。アポトーシス関連遺伝子のBcl-2、Bcl-x、p53の歯上皮での発現を調べたところ、Bcl-2およびBcl-xの発現が著明に増強していたが、p53の発現は野生型と差が認められなかった。Msx1・Msx2ダブルノックアウトマウスでは肢芽の指間組織のアポトーシスも抑制されていた。Msx2は、Bcl-2およびBcl-xの発現を抑制することによりアポトーシスを誘導する機能を有することが推測された。現在、in vitroの実験系での証明を試みている。3.無脳症(神経管閉鎖不全)、心奇形、唇・口蓋裂、四肢の奇形の分子機構の解明研究計画調書に記載した実験計画にしたがって、関連遺伝子の発現をMsx1およびMsx2のノックアウトマウス組織で調べているが、実験途中にあり、現在のところ一定の結論は得られていない。4.Msx1、Msx2、Hoxa10の下流遺伝子のクローニングそれぞれのノックアウトマウス組織を用いたdifferential display法により、ノックアウトマウス組織で発現量が減少あるいは増加する遺伝子をいくつか得ることができた。ほとんどが新規の遺伝子であるため、遺伝子ライブラリーのスクリーニングおよびin situ hybridizationによる解析を進めているところである。

1.Msx3ノックアウトマウスの is made with about 13kb. At the beginning, ホメオボックスを有するexon2をcontains 3kbのフラグメントをexcluded the targeting vector and used it, G418とGANCによるpositive-negative selectionを行ったが, homologous recombinantは得られなかった.そこで、ホメオボックスを合む1.8kbのフラグメントを出いたtargeting vectorに成しstraightしたところ、numberのhomologous recombinantsが得られた.これらのhomologous recombinantsをBALB/cおよびC57BL/6マウスのblastocystにmicroinjectionし、キメラマウスを成した. Now, the growth of the adult body, the future, germline Transmission したキメラマウスをWild type マウスと mating することにより, ヘテロjoined body およびホモjoined body をget る predetermined である. 2.Msx2 とアポトーシスMsx2 ノックアウトマウスでは, abnormal growth of the epithelium of the nose. The TUNEL method is used to produce the process of production, and the Msx2 method isウトマウスでは, wild type められる歯epithelial でのアポトーシスが全く recognized められなかった. Bcl-2, Bcl-x, p53 epithelial epithelium, Bcl-2, Bcl -2およびBcl-xの発appearsが出明に Increasestrengthしていたが, p53の発appearsはwild-typeとdifferentがcognizesめられなかった. Msx1・Msx2 is a ダブルノックアウトマウスではlimb buds and interdigital tissues of the body. Msx2は、Bcl-2およびBcl-xの発appears to inhibit the function and induces the function. Now, it is proven that the test is done in vitro. 3. Asymptomatic syndrome (neurospinal insufficiency), odd-shaped heart, cleft lip and palate, odd-shaped limbs, molecular mechanism of molecular mechanism, and related legacy.子の発成をMsx1およびMsx2のノックアウトマウスorganizationで调べているが, 実験 on the way にあり, now のところdetermined conclusion は got られていない. 4. Msx1, Msx2, and Hoxa10 are different from each other. The display method is the same as the display method.ほとんどが新码の伝子であるため、弝子ライブラリーのスクリーニングおよびin situ hybridizationによるanalyticsを入めているところである.