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カエル卵母細胞の無細胞系を用いた体細胞核初期化の解析システム

使用无细胞青蛙卵母细胞系统进行体细胞核重编程的分析系统

基本信息

批准号：
16045204
负责人：
大隅圭太
金额：
$ 3.46万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16045204/
关键词：
細胞核初期化カエル卵母細胞無細胞系赤血球核ゲノム DNA複製

项目摘要

除核した成熟卵に移植された体細胞核によって胚発生がなされるためには、移植後の最初の体細胞分裂周期においてゲノムDNAが正常に複製されることが不可欠である。正常なDNA複製の有無は分裂期に正常な染色体が形成されるか否かによって判定できる。私達は、成熟期の卵母細胞(減数第一分裂中期)と成熟卵(減数第二分裂中期)から調製した細胞質抽出液で赤血球核を処理し、この核が受精卵の細胞周期を再現する賦活卵抽出液中でDNA複製と分裂期の染色体形成を行うかを調べ、次の点を明らかにした。前処理せずに賦活卵抽出液に加えた赤血球核は、凝縮した形態を維持し、DNA複製、分裂期の染色体形成が全く見られないのに対し、成熟卵の抽出液で前処理したものは、一部が賦活卵抽出液中で成長した核を形成してDNA複製を行い、分裂期には核膜が崩壊してクロマチンが凝縮するが、染色体は形成されない。一方、卵母細胞抽出液で前処理したものは、一部がよく成長した核を形成してDNA複製を行い、さらに、分裂期には正常な染色体を形成する。したがって、成熟卵より卵母細胞の方が、赤血球核のゲノムDNAの複製を可能にする核のリモデリングを誘起する能力が高いことが判明した。さらに、体細胞核と受精卵で異なることが知られているリンカーヒストン(クロマチン)に関して、体細胞型から受精卵型への置換の程度とDNA複製が関連するかについて、特異抗体を用いて解析した。その結果、卵母細胞と成熟卵のどちらの抽出液でも、赤血球核からの体細胞型リンカーヒストンの除去および、初期胚型リンカーヒストンの結合が誘起されることが示され、DNA複製との直接的な関連性は認められなかった。今後は両者を程度を量的に調べ、定量的な解析をする必要がある。

In addition to nuclear mature egg transfer, somatic cell nuclear development, embryo development, transfer of the initial somatic cell division cycle, DNA replication, and so on. Normal DNA replication and the presence or absence of mitotic phase Normal chromosome formation and determination The oocyte at mature stage (metaphase I of meiosis) and mature egg (metaphase II of meiosis) are modulated and the cytoplasm extract is processed and the nucleus is reproduced. The DNA replication and chromosome formation at metaphase I and metaphase II of meiosis in the activated egg extract are modulated. The pre-treatment of viable egg extracts includes the maintenance of erythrocyte nuclear morphology, DNA replication, chromosome formation during division, and the pre-treatment of mature egg extracts. One part of the oocyte extract is processed, the other part is grown, the nucleus is formed, the DNA replication is carried out, and the normal chromosome is formed. The ability to induce DNA replication in mature oocytes and erythrocytes is high. In addition, the relationship between somatic cell nucleus and zygote is related to the degree of substitution between somatic cell type and zygote type and DNA replication, and the analysis of specific antibodies. The results showed that oocytes and mature eggs were separated from the extract, red blood cell nuclei were separated from somatic cells, and early embryo types were separated from somatic cells. In the future, it will be necessary to adjust the degree of measurement and analyze it quantitatively.

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Emi1-mediated M-phase arrest in Xenopus eggs is distinct from cytostatic factor arrest

DOI：
10.1073/pnas.0405300101
发表时间：
2004-08-24
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Ohsumi, K;Koyanagi, A;Kishimoto, T
通讯作者：
Kishimoto, T

APC/C-mediated degradation of cyclin B participates in CSF arrest in unfertilized Xenopus eggs

APC/C 介导的细胞周期蛋白 B 降解参与未受精非洲爪蟾卵的 CSF 停滞

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Developmental Biology 279・2
影响因子：
0
作者：
Yamamoto;T.M.
通讯作者：
T.M.

Linker histone variants control chromatin dynamics during early embryogenesis

DOI：
10.1073/pnas.0409824102
发表时间：
2005-04-19
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Saeki, H;Ohsumi, K;Kaneda, Y
通讯作者：
Kaneda, Y

Nucleoplasmin assembly protein-1 is a linker histone chaperone in Xenopus eggs.

Nucleoplasmin assembly Protein-1 是非洲爪蟾卵中的连接组蛋白伴侣。