权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

単離表層と卵抽出液による無細胞系における収縮環構築

使用分离表面层和鸡蛋提取物在无细胞系统中构建收缩环

基本信息

批准号：
21657048
负责人：
大隅圭太
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21657048/
关键词：
細胞表層無細胞系収縮環カエル卵

项目摘要

本研究は、カエル卵抽出液とカエル卵の単離表層を組み合わせることによって、収縮環の形成を誘起できる無細胞系を構築することを目指し、(1)卵表層単離法、(2)卵抽出における星状体形成の誘起、(3)表層の抽出液処理条件、(4)単離表層における収縮環形成の評価系、の4項目について検討を行うことを目的としている。平成21年度には申請者の異動(東京工業大学から名古屋大学)による研究室の移設や実験室の改修などにより、(3)と(4)については充分に検討することができなかったが、他の項目に関しては以下の成果が得られた。(1)卵表層単離法については、シアノアクリレートを薄く塗布したカバーガラスを卵(賦活後に囲卵腔が形成された卵の場合は、フィコール液で処理後)に圧着後、氷令した卵抽出液調製用の緩衝液中でパスツールピペットによる水流で細胞質を除去するという方法を確立し、この方法により、細胞質の混入が少ない表層標品が調製されることを確認した。この方法によって未成熟卵母細胞、減数第1分裂期の卵母細胞、成熟卵、賦活卵の各々から単離表層を調製し、アクチンフィラメントの制御因子であるアニリン蛋白質についてウエスタン解析を行ったところ、表層に局在するアニリンは、減数分裂の再開、進行に伴ってその量が著しく増加し、電気泳動の移動度が減少することまた、賦活後には、移動度の増加が起こることが示された。(2)卵抽出における星状体形成の誘起は、分裂期に停止した未受精卵抽出液に精子を添加することで再現性よくなされることが確認された。これらの結果に基づいて、星状体を含む卵抽出液中で賦活卵の単離表層をインキュベートした後に、卵抽出液から表層を回収し、表層のアニリンにどのような変化がもたらされるかを現在解析中である。

In this study, we focused on the following aspects: (1) egg surface isolation method,(2) induction of astroid formation during egg extraction,(3) surface extract treatment conditions,(4) evaluation system of ring formation during egg surface isolation, The 4 projects are planned for the future. The following results were obtained in connection with the transfer of applicants (Tokyo Institute of Technology and Nagoya University), the relocation of research laboratories and the renovation of research laboratories,(3) and (4). (1)The surface layer of the egg is separated from the surface layer of the egg.(After activation, when egg cavity is formed and egg is treated, after the treatment of egg extract solution), after pressure, after the preparation of egg extract solution, the method of removing cytoplasm by water flow is established, and the method of removing cytoplasm is confirmed. This method involves modulating the surface layer of immature oocytes, meiosis 1 oocytes, mature eggs, and viable eggs, controlling factors for protein analysis, increasing the amount of protein in the surface layer, increasing the amount of protein in the surface layer, and decreasing the mobility of electrophoresis. After activation, the mobility increases. (2)The induction of astroid formation during egg extraction, the cessation of mitosis, and the addition of sperm to the extract of unfertilized eggs were confirmed. The results are as follows: 1. In the base layer, astroid, egg aspirate, viable egg, surface layer, egg aspirate, egg aspirate