ASC依存性アポトーシスの分子機構とPYNODの抑制効果の検討

ASC依赖性细胞凋亡的分子机制及PYNOD的抑制作用研究

• 批准号: 17014035
• 负责人: 須田 貴司
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17014035/
• 关键词: アポトーシス; ASC; PYNOD; CARD12; Bid; カスパーゼ

ASCはCARD12等と結合してアポトーシス等を誘導する細胞質蛋白質で、その遺伝子は様々ながん組織で発現が抑制されている。しかし、ASCのアポトーシス誘導機構は明確になっていない。我々は、CARD12とNod2の融合蛋白(C12N2)を発現させ、MDP(Nod2のリガンド)でASC依存性アポトーシスを誘導する実験系を開発した。本研究では、この実験系を用いASC依存性アポトーシスの分子機構を検討した。さらに、我々が最近発見した新規ASC阻害蛋白PYNODについて、がん細胞における発現とASC誘導アポトーシスに対する効果を検討した。結果は以下の通りである。1)種々のがん細胞にC12N2とASCを発現させ、MDPで刺激したところ、調べた全ての細胞株でアポトーシスが誘導された。2)種々のドミナントネガティブ(DN)変異体やsiRNA、カスパーゼ阻害剤などを用いた検討から、ASCはFADD非依存性にカスパーゼ8を介してアポトーシスを誘導し、さらにタイプ2細胞においてはカスパーゼ8で切断されるBid依存性に、ミトコンドリア経路のアポトーシスを誘導することが判明した。3)ASCとカスパーゼ8は細胞内でスペックと呼ばれる凝集塊に共局在した。一方、FADD, Bax, Nod2などとの共局在は認められなかった。4)組替ヒトPYNOD蛋白を特異的に検出する単クローン抗体の樹立に成功した。5)この抗体を用い、PYNOD mRNAの発現が確認された10種類のヒトがん細胞株についてPYNOD蛋白の検出を試みたが、検出できなかった。内在性PYNODの検出にはより高親和性の抗体が必要と思われる。6)PYNODを細胞に一過性に発現させるとASC依存性アポトーシスを阻害した。以上、ASCは種々のがん細胞にカスパーゼ8依存性のアポトーシスを誘導し、PYNODはこのアポトーシスを抑制しうることが判明した。

ASC binds CARD12 and inhibits the development of cytoplasmic proteins and proteins in tissues. In addition, ASC's guidance mechanism is clearly defined. We also developed a system for the development of CARD12 and Nod2 fusion protein (C12N2) and the induction of ASC dependent mutations in MDP(Nod2 fusion protein). In this study, the molecular mechanism of ASC dependency was discussed. Recently, we have discovered new ASC inhibitor PYNOD, and we have discussed the effects of ASC inhibitor on cell development and ASC induction. The result is that the following is not the case. 1)C12N2 and ASC were induced by MDP stimulation and modulation of the whole cell line. 2)In the case of a virus, the virus can be detected by detecting the presence of a siRNA, a virus inhibitor, an ASC FADD independent virus inhibitor, and a virus inhibitor. 3)ASC One side, FADD, Bax, Nod2 <$ 4) The successful establishment of antibodies against PYNOD protein was demonstrated in the specific detection of PYNOD protein. 5) With the use of this antibody, the detection of PYNOD mRNA has been confirmed and the detection of PYNOD protein in 10 different cell lines has been tested and detected. Intrinsic PYNOD detection is necessary for high affinity antibodies. 6)PYNOD is a transient phenomenon in cells and ASC is a dependent disorder. The above results show that ASC has the ability to induce and inhibit the development of cell culture.

项目成果

ASC-mediated NF-κB activation leading to interleukin-8 production requires caspase-8 and is inhibited by CLARP

• DOI: 10.1074/jbc.m412284200
• 发表时间: 2005-04-15
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Hasegawa, M;Imamura, R;Suda, T
• 通讯作者: Suda, T

Apaf-1様タンパク質:炎症と細胞死のシグナルの新しい接点

Apaf-1样蛋白：炎症和细胞死亡信号之间的新界面

• 发表时间: 2005
• 期刊: 細胞工学 24巻9号
• 作者: Hasegawa;M.;須田貴司
• 通讯作者: 須田貴司

PYPAF3, a PYRIN-containing APAF-1-like protein, is a feedback regulator of caspase-1-dependent interleukin-1β secretion

• DOI: 10.1074/jbc.m410057200
• 发表时间: 2005-06-10
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Kinoshita, T;Wang, YT;Suda, T
• 通讯作者: Suda, T