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細胞接着・運動におけるDockファミリー蛋白質の機能及びその活性制御機構の解析

Dock家族蛋白在细胞粘附和运动中的功能及其活性控制机制分析

基本信息

批准号：
17014049
负责人：
加藤裕教
金额：
$ 4.99万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17014049/
关键词：
Rho 細胞運動低分子量G蛋白質インテグリン

项目摘要

がん細胞の浸潤・転移に深く関連のある細胞接着や運動に関して、Rhoファミリーの低分子量G蛋白質の関与がこれまでにも数多く報告されている。最近Dock180に代表される、新しいタイプのRhoファミリーG蛋白質活性化因子(Dockファミリー)の存在が明らかになった。本研究では、我々が新しく見出したDock180の活性制御メカニズムがインテグリンによる細胞の接着や運動に関与しているか否かを調べる目的で、RNA干渉によりRhoGの発現を特異的に抑制させたHeLa細胞を樹立し解析を行った。具体的にはヒトRhoGを特異的にノックダウンさせる短いヘアピン構造のRNAを発現することができるベクターをHeLa細胞に導入し、安定にそのヘアピン構造のRNAを発現する細胞を樹立した。合わせてコントロールの短いヘアピン構造のRNAを安定に発現することができる細胞も樹立し、コントロール細胞として用いた。これらの細胞をファイブロネクチンでコートした培養皿上にまいたところ、親細胞やコントロールの細胞では15分後に細胞膜の伸展とラッフリングの形成が見られたが、RhoGノックダウン細胞ではそれらの形成が抑制されていた。次に細胞運動への影響を、Wound healing assay及びTranswell assayの2通りの系で調べてみたところ、どちらの系においてもRhoGノックダウン細胞はその運動能が有意に抑制されていることが確認された。特にWound healing assayの系においては、細胞が運動する方向の先端に作られるラメリポディアの形成及び細胞内のRac1の活性が有意に抑制されていることが観察された。一方RhoGノックダウン細胞における運動能の低下は、ELMOとDock180を過剰発現することにより回復した。以上の結果から、活性化されたRhoGがELMO-Dock180複合体を細胞膜へと移行させ、そこでRacを活性化して細胞膜のラッフリングとそれに伴って起こる膜の伸展が起こり、細胞の接着や運動を促進することが明らかになった。

The relationship between cell infiltration and migration, cell movement, and low molecular weight G proteins has been reported. Recently Dock180 represents the existence of a new protein activation factor (Dock). In this study, we found that the activity of Dock180 was inhibited by RNA stem cells, and the expression of RhoG was inhibited by HeLa cells. Specific RhoG-specific RNA expression in HeLa cells was introduced and stabilized. The short term structure of the RNA is stable, and the cells are established and used. The cell membrane expansion and formation of the cell membrane were inhibited 15 minutes after the cell membrane expansion and formation of the cell membrane. The effect of cell movement on the Wound healing assay and the Transwell assay is confirmed by the intentional inhibition of cell movement. In particular, the Wound healing assay is intentionally inhibited in the direction of cell movement. A Rhodium cell has a low kinetic energy and an ELMO Dock180 has a low kinetic energy. The above results show that RhoG and ELMO-Dock180 complexes are activated to promote cell membrane migration and cell membrane elongation.