ヒト癌組織における抗原ペプチド産生能に関する基礎的研究

人类癌组织产生抗原肽能力的基础研究

• 批准号: 17016081
• 负责人: 鵜殿 平一郎
• 金额: $ 4.99万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17016081/
• 关键词: プロテアソーム; 癌組織; hsp90; 抗原プロセシング

微量のヒト癌組織からオーダーメイドにプロテアソームを分離精製する事を可能にした。1,リコンビナント-ヒトhsp90α、の発現・精製を行った。2,2例のヒト癌組織からのライセートの調整およびプロテアソームのin vitroアッセンブリ;大腸癌及び周囲の正常組織約0.1〜0.6cm^3から細胞ライセートを作製し、hsp90αを加えて、プロテアソームのアッセンブリを行った。3,アッセンブリされたプロテアソームの精製系の確立;1、におけるリコンビナント蛋白は全て6xヒスチジンタグをそのN末側にもつ。Ni^<2+>アガロースでpull downし、これをnative-PAGEで分離しsuc-LLVY-amc及びboc-LRR-amcの加水分解活性を指標に活性を検出した(In-Gel hydrolysis assay)。4,native-PAGEゲルをニトロセルロース膜に転写し、特異的抗体を用いてプロテアソームの構造解析を行った。結果)0.1cm^3ほどのヒト癌組織又はその周囲の正常組織より酵素活性を有したプロテアソームを再構成し、分離精製できた。得られたプロテアソームはハイブリッド型とホモPA28型が主体であり、キモトリプシン様活性を有していた。しかし、トリプシン様活性は正常組織より回収したホモPA28型プロテアソームで極めて高いのに対し、癌からの活性は微弱であった。また、品質管理E3ユビキチンリガーゼと呼ばれるCHIPが両方の組織のホモPA28型プロテアソームに会合していた。20Sコアについては、正常組織ではXタイプ優位のスタンダード型が、癌組織では免疫プロテアソームのタイプが優位であった。以上より極微量(〜0.1cm^3)の凍結癌組織からhsp90αを用いてプロテアソーム再構成を促し、精製分離できることが明らかにされた。これらのプロテアソームを用いて癌ペプチド前駆体の切断実験が可能と判断された。

Microamounts of cancer tissue can be isolated and purified. 1, 2, 2 cases of colorectal cancer tissue, colorectal cancer and normal tissue about 0.1 ~ 0.6 cm^3, hsp90 α, hsp90 α, hsp 3. Establishment of the fine system of the system;1. Complete the 6x system of the system. Ni^<2+> is pulled down, and the activity is measured by native-PAGE separation of suc-LLVY-amc and boc-LRR-amc as indicators of hydrolytic activity (In-Gel hydrolysis assay). 4,native-PAGE analysis of the structure of the antibody in the middle of the solution The results showed that 0.1 cm^3 ~(-3) of the tumor tissue was completely different from that of the normal tissue, and the enzyme activity was higher than that of the normal tissue. The main body of PA28 type has the activity of " The activity of PA28 is very high in normal tissues and very weak in cancer tissues. E3 quality control system for the CHIP system 20S The frozen cancer tissue with the above fine particle amount (~ 0.1cm^3) is divided into hsp90 α and hsp90 α. The reconstruction of the frozen cancer tissue is promoted and purified. This is the first time that a person has ever been able to use a computer to switch off a computer.

项目成果

プロテアソームの再構成方法

如何重建蛋白酶体

• 发表时间: 2005

Interferon regulatory factor 4 negatively regulates the production of proinflammatory cytokines by macrophages in response to LPS

• DOI: 10.1073/pnas.0504226102
• 发表时间: 2005-11-01
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Honma, K;Udono, H;Yui, K
• 通讯作者: Yui, K