シヤペロンによる再構築されたプロテアソームの構造機能解析

伴侣重组蛋白酶体的结构和功能分析

基本信息

项目摘要

分子シャペロンhsp90αを用いて、任意の細胞抽出液より26Sプロテアソームをin vitro構築することが可能である事を明らかにし、その構造及び機能の解析を行った。その結果以下の事が明らかになった。1、ヒスチジンタグ-hsp90αをATP存在下の細胞抽出液に加えイミダゾールで回収する事により、26Sプロテアソーム及びハイブリッドプロテアソームが得られた。これらのプロテアソームは特異的基質であるsuc-LLVY-amcを加水分解した。またこの分子複合体は、hsp90の特異的阻害剤であるゲルダナマイシン処理により構造が破壊された。即ち、これらのプロテアソームの構築とその維持にhsp90αが重要な役割を果たしていることが推察された。2、ヒスチジンタグ-hsp90αをATP非存在下の細胞抽出液に加える事により、hsp90α-20Sプロテアソームを構築する事ができた。このプロテアソーム複合体は、特異的基質であるsuc-LLVY-amcに対する加水分解活性を示さないが、MHCクラスIペプチドをフランキングを含む合成ペプチドから切り出す事ができた。また、この分子複合体の中には、hsc70,hsp40,p23,CHIPなどのシャペロン或はコシャペロン分子が会合していた。この分子複合体をさらにATP処理するとhsp40,p23,CHIPは遊離し最後にhsp90α/hsc70/20Sのみからなる複合体が得られた。hsp90α/hsc70/20Sは同様に合成ペプチドを切断する事ができた。一方、シャペロンの会合しない20Sのみの構造ではMHCクラスIペプチドを切り出す事は出来なかった。この結果は新規のプロテアソームの存在を示唆するが、生理学的にそのような構造のプロテアソームが細胞内に存在するか否かについてはさらなる検討が必要と考えられた。
The molecular structure and function of hsp90 α can be analyzed by using any cell extract and analyzing the structure and function of hsp90 α. As a result, the following things happen. 1. Cell extract in the presence of ATP was added to the solution. This is the first time that I've ever been able to do this. The molecular complex is composed of two components: HSP90 and HSP90. That is to say, the construction and maintenance of hsp90α are important to the development of the system. 2. Cell extract in the absence of ATP was added to the solution, and hsp90 α-20S was added to the solution. The protein complex is composed of a specific matrix, suc-LLvy-amc, and an MHC complex. HSC70,HSP40,p23,CHIP,CHIP. This molecular complex was treated with ATP and then hsp40,p23,CHIP was dissociated and finally hsp90 α/hsc70/20S was obtained. hsp90α/hsc70/20S The structure of a square, a The results show that the existence of a new type of protein is necessary to investigate the physiological structure of a protein.

项目成果

期刊论文数量(6)
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  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 期刊:
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  • 作者:
    Kazuki Taniguchi;Shinichiro Sasahara et al.;Iuchi Y;Arawaka S;Kobayashi H;Nara H;Udono H et al.
  • 通讯作者:
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Kazuki Taniguchi;Shinichiro Sasahara et al.;Iuchi Y;Arawaka S;Kobayashi H;Nara H;Udono H et al.;山野武寿 他
  • 通讯作者:
    山野武寿 他
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