ストレス蛋白の分子生物学的特性に基づく癌免疫治療研究

基于应激蛋白分子生物学特性的癌症免疫治疗研究

• 批准号: 13218102
• 负责人: 鵜殿 平一郎
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218102/
• 关键词: 癌抗原ペプチド; CTL; hac70; ワクチン; ヘルパーペプチド

リコンビナントhsc70-癌抗原ペプチド融合分子により活性の高いCTLを誘導できることを我々は明らかにした。一方CTL認識ペプチドをIFAと混合して免疫する際に同じMHCハプロタイプ(クラスII)拘束性のヘルパーペプチドと同時投与してやるとCTLの感作が強く行われる。そこで、hsc70分子のN末にモデル抗原OVA(ovalubumin)のI-A^b拘束性ペプチドOVA_<265-280>を融合し、同時にC末にCTLエピトープOVA_<257-264>を融合させたリコンビナント分子を作製した。この分子でマウスを免疫し脾臓細胞をin vitroで6日間ペプチド刺激し、得られたエフェクター細胞(CD8^+T細胞)の細胞傷害活性とELISPOTアッセイ法によるIFNγ産生細胞数を解析した。その結果細胞傷害活性はCTLエピトープ単独融合分子とヘルパー及びCTLエピトープ両方融合分子では差が認められなかった。しかし、IFNγ産生細胞数はヘルパーエピトープ付加により、2〜4倍に増加した。即ち、ヘルパーエピトープはhsc70に融合した場合、CD8^+T細胞の感作活性を増強させることが判明した。OVA_<265-280>の代わりにI-A^d拘束性のPlasmosium yoelii circumsporozoite蛋白由来のヘルパーエピトープを融合させた場合にはOVA_<257-264>に対する反応性の亢進は認められないことよりMHC拘束性が確認された。さらにOVA_<265-280>とマウスメラノーマ抗原TRP2_<180-188>の両方をhsc70に融合し、同様に解析した結果、TRP2_<180-188>に対してIFNγ産生細胞数はTRP2_<180-188>単独融合分子の場合よりもやはり2〜4倍増加していた。即ち、ヘテロのヘルパーエピトープであってもMHC拘束性が一致していれば感作されるCD8^+T細胞数が増加することが判明した。

hsc70-cancer antigen fusion molecule with high CTL activity One party recognizes that the immune system is mixed with the MHC system, and the other party recognizes that the immune system is mixed with the CTL system. The N-terminal antigen OVA(ovalubumin) of hsc70 molecule was fused to the I-A^b binding protein, and the C-terminal CTL antigen OVA was fused to the I-A^<265-280>b binding protein<257-264>. The number of IFNγ-producing cells was analyzed by ELISPOT assay and the cytotoxic activity of CD8 +T cells was determined by ELISA. As a result, the cell injury activity of CTL is different from that of other fusion molecules. The number of IFNγ-producing cells increased by 2 to 4 times. In other words, CD8^+T cell sensory activity increased when hsc70 was fused. The <265-280>origin of Plasmosium yoelii circulozoite in OVA is confirmed by its binding property<257-264>. The number of <265-280>TRP2<180-188>-producing <180-188>IFNγ-producing cells increased by <180-188>2 - 4 fold in the case of TRP2-alone fusion molecules. That is, the number of CD8 +T cells increased in response to MHC binding.

项目成果

Sano I.et al.: "Prolonged survival of rat cardiac allograft with proinflammatory cytokine inhibitor"J. Heart Lung Transplant.. 20. 583-589 (2001)

Sano I.等人：“用促炎细胞因子抑制剂延长大鼠同种异体心脏移植物的存活”J。

Murata, S. et al.: "Immunoproteasome assembly and antigen presentation in mice lacking both PA28α and PA28β"EMBO J. 20. 5898-5907 (2001)

Murata, S. 等人：“缺乏 PA28α 和 PA28β 的小鼠中的免疫蛋白酶体组装和抗原呈递”EMBO J. 20. 5898-5907 (2001)

Udono, H. et al.: "Generation of cytotoxic T lymphocytes by MHC class I ligands fused to heat shock cognate protein 70 (hsc7O)"Int. Immunol. 13. 1233-1242 (2001)

Udono, H. 等人：“通过与热休克同源蛋白 70 (hsc7O) 融合的 MHC I 类配体生成细胞毒性 T 淋巴细胞”Int。

Levey, D.L.et al.: "Identification of a tumor-associated contact-dependent activity which reversibly downregulates cytolytic function of CD8+ T cells"Cancer Immunity. 1. 5-17 (2001)

Levey, D.L. 等人：“鉴定肿瘤相关的接触依赖性活性，该活性可逆地下调 CD8 T 细胞的溶细胞功能”癌症免疫。