ジアシルグリセロールキナーゼ発現に伴う機能性脂質動態の変動と細胞の応答

与二酰甘油激酶表达相关的功能性脂质动力学和细胞反应的变化

• 批准号: 06780485
• 负责人: 和田 郁夫
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780485/
• 关键词: 信号伝達; ジアシルグリセロールキナーゼ; 細胞刺激; 細胞増殖; 核; 移行; 細胞内局在; Z inc finger

ジアシルグリセロールキナーゼ(DGK)の信号伝達における役割を明らかにするために、IPTGによるon-offを行うlacオペロンを含む発現ベクターにDGKをつなぎ、これをlacオペロンを発現するNIH3T3細胞に導入し、IPTGに依存的にDGKを発現する細胞を確立した。発現はIPTGの投与量に伴い増加したが、充分な発現量を得るために必要なIPTGの濃度はlacオペロンを発現する3T3細胞においては弱いアゴニストとして働くことが明らかになった。このため、PDGF等の刺激に対する細胞応答におけるDGKの役割はこの系では充分な解析を行うことが困難であった。そこで、エピゾ-マルなプラスミドの増殖を行うベクターpRep8にDGKを組み込み、ヒスチジノールを含む選択培地で発現細胞を集めて、semi-transientな発現系でのDGKの信号伝達のおける役割を多角的に調べた。その結果、DGKの過剰発現は、PDGFやLPAによってひきおこされるS期への進行を完全に阻止することが見い出された。この知見はstable epressionによる低レベルでの発現により観察された細胞増殖の亢進とは正反対の現象であり、従ってDGKはその発現量に応じてダイナミックな増殖能の調整を行っていることが示唆された。また最近胸腺細胞をCalphostin等の処理によりDGKのZn fingerの機能が阻害された場合にはDGKは細胞質から核に移行し、またコンカナバリンAによる刺激によっても同様の移行が起こることを見い出した。現在、このDGKのZn fingerは(おそらく多の因子との相互作用により)DGKの細胞質への局在に必要であり、刺激がZn fingerの構造を変化させ核移行シグナルを露呈させ、translocationを行うというモデルを検討中であり、これは前述の細胞増殖機能の調節を可能にするDGKの分子的基礎をなすものと考える。

The signal transmission of DGK (DGK) is detected by IPTG on-off and lac on-off, including the detection of DGK by NIH 3T3 cells, and the detection of IPTG dependent DGK by lac on-off and lac on-off cells. The amount of IPTG added to the cells increased, and the amount of IPTG fully recovered increased. DGK's response to stimuli such as PDGF is difficult to fully analyze. The DGK signal transmission of the DGK signal in the semi-transient development system is multi-angle modulation. As a result, DGK'S progress was completely prevented by PDGF and LPA. This phenomenon is known as the phenomenon of stable depression, low level of cell proliferation, positive and negative response, and DGK's ability to regulate cell proliferation. The function of Zn finger of DGK was inhibited by treatment of thymocytes such as Calphostin, etc. The cytoplasmic migration of DGK was inhibited by stimulation of Zn finger. Now, the DGK Zn finger is necessary to stimulate the structural transformation of the Zn finger, to expose the nuclear migration mechanism, to conduct the translocation analysis, and to investigate the molecular basis of the DGK that may regulate the aforementioned cell proliferation function.

项目成果

Kai,M.et al.: "Molecular cloning of a cliacylglycerol lcnaso isozyme predominantl,expressed in human retina with a truncated and inactive enzyne expression in more other human cells." J.Biol.Chem.269. 18492-18498 (1994)

Kai,M.等人：“在人类视网膜中表达的主要是丙酰基甘油同工酶的分子克隆，在更多其他人类细胞中表达截短且无活性的酶。”

Wada,I.et al.: "Chapeone function of calnexin with the folding intermediate of gp80,the magior seretory protein in MDGK cells." J.Biol.Chem.269. 7464-7472 (1994)

Wada,I.et al.：“钙连接蛋白与 gp80 折叠中间体的伴侣功能，gp80 是 MDGK 细胞中的重要分泌蛋白。”