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量子ドット・有機・バイオプローブを用いる単一細胞の蛍光ダイナミクス

使用量子点、有机和生物探针的单细胞荧光动力学

基本信息

批准号：
17034026
负责人：
青山安宏
金额：
$ 2.88万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は細胞内の遺伝子診断のための手法の確立と、核酸プローブを効率よく細胞内に導入するキャリアの開発について検討した。(1)遺伝子診断に関してはモレキュラービーコン型のリボレギュレータを用いる方法を完成し、何の修飾もしていないRNAあるいはDNAプローブをタンパク合成系の培地の中で用いることにより、ターゲット配列を選択的に感度よく(1塩基の違いを識別)、非PCR的シグナル増幅を伴って検出できることを明らかにした。また、RNAaseHを用いるとターゲット/プローブ(DNA/RNA)鎖が非可逆的に切断されるため、シグナルの増幅効率がさらに向上することも明らかになった。(2)核酸プローブの送達に関しては、表面がゾルーゲル反応によりセラミック(シリカ)架橋されたセラソームがウイルスサイズ(数十nm)の粒径をもち、遺伝子(プラスミド)との複合化においても融合せず、もとのウイルスサイズを維持することを明らかにした。その結果、HeLa細胞やHepG2細胞への遺伝子(ルシフェラーゼ)導入において、通常のカチオン性リボソームに比べて2桁から3桁高い活性を有する。セラソームは膜脂質が頑強に架橋されている結果細胞膜との融合も抑制され、したがって細胞毒性もきわめて軽微であり、血清存在下においても高い遺伝子導入効率を保持することも示された。

Our は intracellular の heritage 伝 son diagnosis のための gimmick の establish と, nucleic acid プローブを sharper rate よく intracellular に import するキャリアの open 発について beg し検た. (1) posthumous son 伝 diagnosis に masato してはモレキュラービーコン type のリボレギュレータを with いをし, any のる method modified もしていない RNA あるいは DNA プローブをタンパク GeChengXi の petty ので use いることにより, ターゲット match column を sentaku に sensitivity of よく (1 salt の violations いを recognition), non PCR シグナル raised を picture with って検 out できることを Ming らかにした. また, RNAaseH を with いるとターゲット / プローブ (DNA/RNA) lock が non reversible に cut されるため, シグナルの rights of working rate がさらに upward することも Ming らかになった. (2) nucleic acid プローブの served に masato しては, surface がゾルーゲル anti 応によりセラミック (シリカ) bridging されたセラソームがウイルスサイズ (tens of nm) の size をもち, but 伝 (プラスミド) と composite のにおいても fusion せず, もとのウイルスサイズを maintain することを Ming らかにし Youdaoplaceholder0. その results, HeLa や HepG2 cells への heritage 伝 child (ルシフェラーゼ) import において, usually のカチオン sex リボソームに than べて 2 girder から 3 girder high い active をする. セラソームは membrane lipid が tenacious に bridging されていとる results cell membrane fusion のも inhibit され, したがって cytotoxicity もきわめて軽 micro であり, serum in the presence of においても high い heritage 伝 son import を keep working rate することも shown された.