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新規コロニーアッセイ法による腎臓前駆細胞の単離と誘導

使用新型集落测定方法分离和诱导肾祖细胞

基本信息

批准号：
17045027
负责人：
西中村隆一
金额：
$ 4.48万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17045027/
关键词：
腎臓発生幹細胞 Sall1 Sall 腎臓形成前駆細胞ノックインマウス

项目摘要

Sallファミリーは種を越えて保存されたZincフィンガー蛋白である。我々はマウスSall1を発生期腎臓から単離し、この遺伝子が腎臓前駆細胞集団である後腎間葉に発現すること、このノックアウトマウスは腎臓を欠損することを見いだした。さらにSall1の遺伝子座にGFPを導入したマウスを作製し、腎臓前駆細胞集団である後腎間葉が光ることを確認し、さらにそこで発現する遺伝子群を同定している。本計画は、Sall1を使って、腎臓前駆細胞を同定する確実で信頼できる系を確立しようとするものである。まず後腎間葉を解離して、Wnt4を発現するフィーダー上で培養すると、一個の細胞からコロニーが形成され、糸球体や尿細管など多系統の分化マーカーを発現することを見いだした。次いでSall1-GFPノックインマウスの後腎間葉細胞からは、GFPを強発現する分画からのみコロニーが形成された。さらにこのGFPを発現する後腎間葉細胞を再凝集させ器官培養すると,3次元立体構造を再構築できた。またSall1ノックアウトマウスからのコロニーは、分化や数は正常だがサイズが減少していた。これらの結果から、Sall1を強発現する間葉細胞分画に腎臓前駆細胞が存在し、Sall1はその増殖に関与していることが示唆された。このアッセイ系をフィーダー細胞が不要なように改善することを試みたが、未だ成功していない。これはフィーダーからWnt4以外の因子が供給されているためと考えられる。今後このアッセイは腎臓前駆細胞が分化していく際の系譜決定の解析に役立つと考えられ、組織や切片のレベルでしか検討されていなかった腎臓形成が、単一細胞レベルで解析できるようになる可能性を秘めている。

Sall, please. We have a kidney failure, a kidney failure. The GFP of Sall1 gene locus was introduced into the control group, and the gene subgroup of the renal anterior lobe was identified. In this study, we established the identity of Sall1 and prerenal cells. After the kidney lobes dissociate, Wnt4 develops, a cell forms, and multiple system differentiation develops. In the second stage, Sall1-GFP was expressed in the mesentery cells of the kidney, and GFP was strongly expressed in the mesentery cells. After GFP was discovered, mesentery cells were reaggregated and organ culture was conducted. Three-dimensional structure was reconstructed. Sall1 The result is that Sall1 is strongly expressed in mesenchymal cells and renal cells, and Sall1 is strongly expressed in reproductive cells. This is the first time I've ever seen you. A factor other than Wnt4 is supplied. In the future, the differentiation of renal cells before kidney transplantation will be analyzed in detail. The possibility of renal cell differentiation and analysis will be discussed in detail.