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B型肝炎ウイルスX蛋白の転写修飾機能と細胞形質転換能促進

乙型肝炎病毒X蛋白的转录修饰功能及促进细胞转化能力

基本信息

批准号：
18012018
负责人：
村上清史
金额：
$ 7.3万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

B型肝炎ウイルスX蛋白(HB_x)の生物の機能を解明するため、HB_xが活性化型H-Ras導入による不死化ヒト初代細胞のoncogene-induced senescence (OIS)に拮抗して細胞を形質転換する能力の解析(村上、中本)と、HB_xに拮抗する宿主因子RMPの生物的機能をfly系で解析(小泉)を進めると共に、レトロウイルス挿入ライブラリーによるマウスのがん化の標的部位の探索(鈴木)を行った。得られた主な結果は、1)不死化ヒト正常線維芽(BJ)細胞系でのHB_xのOIS克服能は、HB_xがp53経路とpRb経路を抑制する結果と示唆された。HB_x形質転換促進能には、aa74-94とaa111-131の2配列が必須であり、aal-49が付加的な役割を示した。ジーンチップ解析では、HB_xと活性型Rasが共発現した不死化BJ細胞で、不死化BJ細胞に比較し、アポトーシス関連因子やMAPキナーゼシグナル伝達経路など細胞周期と細胞増殖に関与する因子と、SPCなど癌遺伝子関連因子の発現亢進が認められた。2)hTERT導入不死化ヒト初代肝細胞株(TTNT-16)を用いた解析でも、HB_xは活性化型H-RasによるOISを克服能を示し、細胞の形質転換を促進した。3)ショウジョウバエでfRMPとRPB5との関係を解明するため、RPB5 RNAiトランスジェニック(15系統)を作成した。GAL4誘導下でfRMPとRPB5 RNAiが眼成虫原基全体で発現する系で、fRMPとRPB5トランスジェニックRNAiの両方で、通常より小さなサイズの複眼形成が観察され、BrdU標識実験で視神経産生幹細胞の減少が観察された。しかし視神経分化には顕著な異常が観察されなかった。両遺伝子のRNAiが類似の表現型を示す結果は、両者の機能的な相関を示唆した。分化後の視神経でGMR GAL4による両者のRNAi誘導は、共に複眼形成に顕著な異常を惹起しなかった。fRMPとRPB5の発現が、神経幹細胞増殖時に重要な役割を果たすが、神経分化時には必ずしも重要ではないことを示唆するこれらの結果は、RNA polymerases量の減少或いは未集合RPB5の持つ未知機能によるものと推定される。

Analysis of the biological function of hepatitis B virus X protein (HB_x), HB_x, and the ability to antagonize oncogene-induced senescence (OIS) of primary cells in response to the introduction of activated H-Ras (Murakami, Nakamoto), HB_x, and host factors (Koizumi) The search for the target part of the game (Suzuki) The results showed that: 1) OIS of HB_x and HB_x in BJ cell line could overcome the inhibition of p53 and pRb. HB_x physical and chemical transformation promotion function is shown in a74 -94 and a111 -131. The analysis of HB_x and active-type Ras co-expression in non-dead BJ cells, non-dead BJ cells, MAP, SPC, oncogene related factors and their hyper-expression. 2)hTERT was introduced into primary hepatocytes (TTNT-16), and H-Ras was transformed into OIS. 3) The relationship between fRMP and RPB5 is clarified, and RPB5 RNAi is established. FRMP and RPB5 RNAi induced by GAL4 were detected in the whole primordium of adult eyes, and the expression of FRMP and RPB5 RNAi was detected in the normal compound eye formation. The decrease of stem cells produced by BrdU was also observed. It's not like we're going to be able to see anything. The results of RNAi phenotype similarity between the two genes indicate that the RNAi gene is related to the function of the two genes. After differentiation, GMR GAL4 was induced by RNAi, and the formation of compound eyes was abnormal. The expression of fRMP RPB5 is important for stem cell growth and differentiation, but it is important for differentiation. The result is a decrease in the amount of RNA polymerases or a presumption that RPB5 has an unknown function.