マップキナーゼ経路の新規制御因子・阻害薬の分子遺伝学的スクリーニング

MAP 激酶途径新型调节剂和抑制剂的分子遗传学筛选

• 批准号: 18013032
• 负责人: 久野 高義
• 金额: $ 6.27万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18013032/
• 关键词: マップキナーゼ; 制御因子; 低分子量GTP結合たんぱく質; ファルネシル化; ホスファターゼ; タンパク質リン酸化; がん; 阻害薬; 抗がん薬; ファルネシルトランスフェラーゼ; Rho; Ras; 薬物スクリーニング; バルプロ酸; 細胞内輸送

(1)Pmk1シグナル伝達における新規の制御因子を同定することを狙った遺伝子スクリーニングを開発し、vic(免疫抑制薬や塩素イオンの存在下で生存可能の意)変異体を単離した。その変異体の1つであるvicl-1は、タンパク質フアルネシル基転移酵素のβ-サブユニットをコードしているcpp1^+遺伝子にミスセンス変異を起こさせ、Cpp1の155番目のアスパラギン酸のアスパラギノへのアミノ酸置換をもたらした(Cpp1(D155N))。また、生化学的解析により、Rho2はCpp1の新規の標的分子であることを明らかにした。以上の結果は、Cpp1が低分子量GTPアーゼであるRho2の空間的制御を介したPck2-Pmk1シグナル伝達の主要成分であることを示唆するものである。(2)Wis1-Spc1-Atf1ストレス活性型MAPキナーセシグナル経路を不活性化する因子として既に知られている2C型プロテインボスファターゼ(PP2C)をコードしているptcl^+とptc3^+過剰発現が、カルシニューリン欠損下においてCl^-過感受性を抑圧することを示した。また、これら2つのPP2Cs、およびSpc1の他の負の制御因子であるpyp2^+のmRNAレベルがPmk1依存的であることも示した。特に、Spc1ではなくAtf1の欠損下では細胞壁損傷薬に対して過感受性を示し、カルシニューリン欠損下においてC1^-過感受性をも抑圧した。これらはいずれもPmklMAPキナーゼ経路の構成要素の変異によって分けられる特徴的な表現型である。以上の結果から、PP2CがPmklシグナル伝達において負のフィードバックループに関わっており、またAtf1はPmklMAPキナーゼ経路の下流にある細胞完全性シグナル伝達の主要成分であることが示唆された。(3)マップキナーゼ経路の阻害薬のスクリーニング系を確立し、複数個のリード化合物を同定した。現在はその構造解析と化学合成を進めている。

（1）我们开发了旨在鉴定PMK1信号传导中的新调节剂的遗传筛查，并孤立的VIC（意味着在存在免疫抑制药物或氯离子的情况下可行）。它的一个突变体VICL-1引起了CPP1^+基因的错义突变，该基因编码了蛋白质法烯基转移酶的β-亚基，从而导致在CPP1的155（CPP1（CPP1（CPP1）（CPP1（d155n）））位置，天冬氨酸的氨基酸取代。生化分析还表明，Rho2是CPP1的新型靶标分子。以上结果表明，通过低分子量GTPase Rho2的空间控制，CPP1是PCK2-PMK1信号传导的主要组成部分。 （2）我们证明了编码2C蛋白bossphatase（PP2C）的PTCl^+和PTC3^+过表达，这些过表达已经被称为使WIS1-SPC1-ATF1胁迫的MAP激酶信号传导途径失活的因素，抑制CL^-Hypersenitive clinclineurin Deficitive。我们还表明，这两个PP2C的mRNA水平以及Spc1，Pyp2^+的其他负调节剂均依赖于PMK1。特别是，在ATF1缺乏症而不是SPC1下，它是对细胞壁损害药物的过敏性，并且在钙调神经磷酸酶缺乏症下也抑制了C1^ - 高氧气。所有这些都是独特的表型，这些表型被PMKLMAP激酶途径成分中的突变隔开。这些结果表明，PP2C参与PMKL信号中的负反馈回路，并且ATF1是PMKLMAP激酶途径下游细胞完整性信号传导的主要组成部分。 （3）建立了用于MAP激酶途径抑制剂的筛选系统，并确定了多种铅化合物。目前，我们正在研究结构分析和化学合成。

项目成果

Atf1 Is a Target of the MAP Kinase Pmk1 and Regulates Cell Integrity in Fission Yeast.

Atf1 是 MAP 激酶 Pmk1 的靶标，可调节裂殖酵母中的细胞完整性。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Mol. Biol. Cell 18
• 作者: Y.Tonami;H.Murakami^* K.Shirahige;M.Nakanishi;Miyatake M et. al;Tsutsumi. et. al;Takada H et. al
• 通讯作者: Takada H et. al

Genetic evidence for phospholipid-mediated regulation of the Rab GDP-dissociation inhibitor in fission yeast

• DOI: 10.1534/genetics.106.064709
• 发表时间: 2006-11-01
• 期刊: GENETICS
• 影响因子: 3.3
• 作者: Ma, Yan;Kuno, Takayoshi;Sugiura, Reiko
• 通讯作者: Sugiura, Reiko

Rho2 is a Target of the Farnesyltransferase Cppl and Acts Upstream of Pmk1 MAP Kinase Signaling in Fission Yeast

Rho2 是裂殖酵母中法尼基转移酶 Cppl 的靶标并作用于 Pmk1 MAP 激酶信号传导的上游

• 发表时间: 2006
• 期刊: Molecular Biology of the Cell 17・12
• 作者: 石井 哲;三村 覚;小布施 力史;嘉村 巧;房 月;高田 宏文;堤 聡;松嶋 隆;馬 艶;宮武 信;宮武 信;馬 艶
• 通讯作者: 馬 艶

分裂酵母Protein kinase Cのターゲティング機構の解明

阐明裂殖酵母蛋白激酶C的靶向机制

• 发表时间: 2007
• 作者: 石井 哲;三村 覚;小布施 力史;嘉村 巧;房 月;高田 宏文;堤 聡;松嶋 隆;馬 艶;宮武 信;宮武 信;馬 艶;馬 艶;Deng Lu;村上 貴之
• 通讯作者: 村上 貴之

Valprpic Acid Affects Membrane Trafficking And Cell Wall Integrity in Fission Yeast.

丙酸影响裂殖酵母中的膜运输和细胞壁完整性。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Genetics 175
• 作者: 石井 哲;三村 覚;小布施 力史;嘉村 巧;房 月;高田 宏文;堤 聡;松嶋 隆;馬 艶;宮武 信
• 通讯作者: 宮武 信