カルシニューリンとの拮抗的関係を利用したマップキナーゼ経路の分子遺伝学的解析

利用与钙调神经磷酸酶的拮抗关系对图谱激酶途径进行分子遗传学分析

基本信息

批准号：
16022241
负责人：
久野高義
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

研究代表者らが発見した分裂酵母新規マップキナーゼPmk1系は,細胞増殖とともに細胞形態形成,特に細胞質分裂において重要であり,カルシニューリンと機能的関連性をもつことが既に明らかにされている。また,その構造はヒトの細胞増殖を制御するマップキナーゼと高い相同性を示すので,分裂酵母におけるマップキナーゼの機能解析は,ヒトのマップキナーゼ異常による病態や分子標的治療に直結している。本年度は以下のような結果を得た。1.カルシニューリン制御サブユニットの役割の解明分裂酵母のカルシニューリン制御サブユニットを新たにクローニングし,遺伝子ノックアウトを行なった。ノックアウト細胞に種々の遺伝子を過剰発現することで表現型の変化を調べたところ,制御サブユニットがin vivoにおけるカルシニューリン活性に必須であることが明らかになった。2.マップキナーゼ経路におけるmRNA安定性制御の重要性カルシニユーリンのノックアウト表現型を相補する多コピー抑圧遺伝子の一つを単離し,配列決定をしたところ,RNA結合蛋白質をコードしていた。このRNA結合蛋白質は,Pmk1マップキナーゼを抑制すると思われるPmp1マップキナーゼホスファターゼのmRNAと結合し,安定化するマップキナーゼの抑制因子であることが明らかになった。3.カルシニューリンと機能的に関連する細胞内輸送因子アダプチンApm1の発見温度感受性と免疫抑制薬感受性を指標とした遺伝学的スクリーニングにより遺伝子apm1を発見した。apm1遺伝子ノックアウト細胞は、カルシニューリン活性に対する依存性を示すとともに,ゴルジ体から細胞膜への輸送に異常を示し,Apm1がゴルジから細胞膜への輸送に働いていることが明らかになった。また,Apm1は核にも局在し,機能していることが示唆された。

我们发现的研究人员发现的新型裂变酵母MAP激酶PMK1系统在细胞增殖中很重要，尤其是在细胞因子分析中，并且已经被证明与钙调神经酶具有功能关联。此外，由于其结构显示了调节人类细胞增殖的MAP激酶的高同源性，因此裂变酵母中MAP激酶的功能分析与人类中MAP激酶异常和分子靶向治疗引起的病理直接相关。今年，我们获得了以下结果：1。阐明钙调蛋白调节亚基的作用。裂变酵母的钙调蛋白调节亚基是新克隆的，基因被淘汰了。通过过表达基因敲除细胞中的各种基因来研究表型的变化，并且发现调节亚基对于体内钙调神经酶活性至关重要。 2。在MAP激酶途径中mRNA稳定性调节的重要性是分离出抑制基因的多拷贝抑制基因之一，该基因被分离出来，并分离出Calcinuelin的敲除表型，并测序以编码RNA结合蛋白。这种RNA结合蛋白显示为MAP激酶的抑制剂，它结合和稳定PMP1 MAP激酶磷酸酶的mRNA，这似乎可以抑制PMK1 MAP激酶。 3。发现Adaptin APM1，这是一种与钙调神经酶功能相关的细胞内转运因子。通过使用温度敏感性和免疫抑制药物敏感性作为指标，通过遗传筛查发现了基因APM1。 APM1基因基因敲除细胞表现出对钙调蛋白活性和从高尔基体到细胞膜异常转运的依赖，揭示了APM1在从高尔基体到细胞膜的转运中起作用。还提出APM1位于核与功能性。