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リアルタイム観察法を駆使した神経細胞傷害によるグリア細胞活性化機構の解明

利用实时观察方法阐明神经细胞损伤导致的胶质细胞活化机制

基本信息

批准号：
18053002
负责人：
南雅文
金额：
$ 4.35万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

神経細胞傷害時におけるミクログリアの傷害部位への集積に関して、Iba1-EGFPトランスジェニックマウス(本特定領域研究班の高坂新一先生より供与を受けた)より作製した培養海馬スライスを用いて検討した。昨年度の検討により、局所組織傷害急性期のミクログリア突起伸長にはATPが関与するが、NMDAによる神経細胞傷害後3〜6日において観察される錐体細胞層へのミクログリア集積にはATPは関与しないことが示された。本年度は、神経細胞傷害後のミクログリアによる傷害細胞の貪食に関して検討した。傷害細胞は、propidium iodide(PI)の核内への取り込みにより可視化した。NMDA処置後、PI陽性細胞数は1〜2日後をピークとして増加し、その後、次第に減少することが明らかとなった。リアルタイムイメージングによる検討から、PI陽性細胞が、1つのミクログリアによって取り囲まれた後に消失することが観察された。さらに、ミクログリア毒であるclodronateをあらかじめ処置することで約90%のミクログリアを除去した培養スライスでは、対照群と比較してPI陽性細胞の減少が著しく抑制された。これらのことから、NMDA処置後のPI陽性細胞の減少は、ミクログリアによる貪食の結果であることが示唆された。このミクログリアの貪食作用におけるP2Y6受容体情報伝達の関与を検討するため、UDPとその分解酵素阻害薬ARL67156の存在下で、NMDA処置後のPI陽性細胞数の経時変化を検討した。その結果、UDP+ARL67156存在下においても、非存在下と比較してPI陽性細胞数の減少速度の顕著な違いは見られなかった。

Iba1-EGFP is a new method for studying the accumulation of injured parts of neurons during injury. 3 ~ 6 days after injury, the accumulation of ATP in pyramidal cell layer was observed. This year, the study on the relationship between the damage to cells and the gluttony of neurons was conducted. Injured cells, propidium iodide(PI), and nuclear DNA were visualized. After NMDA treatment, the number of PI positive cells increased 1 ~ 2 days later, and then decreased. The results showed that PI positive cells were detected in all cases, and PI positive cells disappeared in all cases. About 90% of the clodronate was removed from the culture medium and the PI positive cells were inhibited. The decrease of PI positive cells after NMDA treatment was observed. P2Y6 receptor information transmission related to bulimia in the presence of UDP and the enzyme inhibitor ARL67156, and time-dependent changes in the number of PI-positive cells after NMDA treatment were studied. The results showed that the decrease rate of PI positive cells in the presence and absence of UDP+ARL67156 was significantly higher than that in the absence of UDP +ARL67156.