权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

インビトロ血液脳関門システムによる分子・細胞動態リアルタイムイメージング法の開発

利用体外血脑屏障系统开发分子和细胞动力学实时成像方法

基本信息

批准号：
21659016
负责人：
南雅文
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

骨髄間葉系幹細胞(MSC)の静脈内投与は、脳梗塞後の神経機能障害を改善する。昨年度は、マクロファージやミクログリアの脳微小血管内皮細胞(BMEC)層の通過機構に関して検討を行ってきたが、今年度は、臨床応用が期待されているMSCの血液脳関門(BBB)通過機構の解析を行った。はじめに、MSCのBBB通過機構の解析に用いるインビトロ評価系を、BMECからなるインビトロBBBモデルとMSCを組み合わせることで構築した。BMECは全ての細胞が緑色蛍光を発するSD-Tg(CAG-EGFP)ラットから採取して培養したものを、MSCはラット骨髄から採取して培養し、蛍光試薬PKH26で標識したものをそれぞれ用いた。細胞培養インサート(メンブレンのポアサイズは8.0μm)にBMECを播種し、インサートのlowerチャンバーに10%牛胎仔血清を加えた条件下、upperチャンバーにMSC(1.5×10^4cells/cm^2)を加え、24時間後に固定して観察した。BMECの形態や単層構造に顕著な変化は認められない一方で、BMEC層を通過し、BMEC下にてメンブレン上に接着したMSCが多数観察された。また、ポアを通過してメンブレンの裏側に接着したMSCも認められた。MSCがどのようにBMEC層を通過するのかを明らかにするために、タイムラプスイメージングにより両細胞の動態を観察した。その結果、MSCが傍細胞経路を介してBMEC層を通過する様子が観察された。また、MSCがBMEC層を通過する際には、一時的にBMEC間隙が拡がり、通過後、その間隙は閉じて元の状態に戻る様子も観察された。以上より、本研究においてMSCのBMEC層通過を評価・観察できるインビトロ実験系の構築に成功し、この実験系を用いて、MSCが傍細胞経路でBMEC層を通過することを明らかにした。

Intravenous administration of bone mesenchymal stem cells (MSCs) improves neurological dysfunction after infarction. In the past year, the study of the mechanism of microvascular endothelial cell (BMEC) layer was carried out. In the present year, the analysis of the mechanism of MSC blood vessel endothelial cell (BBB) layer was carried out in anticipation of clinical application. BMEC, BBB, MSC, etc. BMEC and MSC have been identified by SD-Tg(CAG-EGFP) for green light emission from whole cells and PKH26 for green light emission. Cell culture medium was seeded with BMEC, cultured with lower BMEC, cultured with 10% fetal bovine serum, cultured with MSC(1.5× 10^4 cells/cm^2), and fixed for 24 hours. The BMEC's morphology and structure are different from those of the BMEC. In addition to the above, it is also possible to use the MSC as a platform for communication. The BMEC layer is the most important layer of the cell. As a result, MSC and BMEC are closely related to each other. The BMEC gap is closed when the MSC passes, and the BMEC gap is closed when the MSC passes. In this study, the BMEC layer of MSC was successfully constructed by evaluating and observing the application of the system, and the BMEC layer of MSC was successfully constructed by using the system.