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テロメアによる染色体維持機構の解明

端粒对染色体维持机制的阐明

基本信息

批准号：
18058010
负责人：
加納純子
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18058010/
关键词：
染色体テロメア Rapl Pot1 分裂酵母 DNA複製チェックポイント

项目摘要

真核生物の染色体末端には、テロメアという構造が存在し、様々な重要な役割を果たしている。テロメア繰り返し配列からなるテロメアDNAは、最末端の一本鎖部分とその内側の二重鎖部分からなる。分裂酵母の一本鎖テロメアDNAには、Pot1タンパク質が結合し、二重鎖テロメアDNAにはTaz1タンパク質が直接結合することが知られている。これまでに我々は、Rap1がTaz1に結合することによってテロメアにリクルートされ、テロメアDNA長を負に制御することを明らかにした。Rap1の分子機能を具体的に明らかにするため、Rap1と相互作用する因子を同定することを試みた。まず、Rap1を細胞抽出液から免疫沈降し、その沈降物に含まれるタンパク質を質量分析により調べた。Rap1に特異的に相互作用する因子として、Pot1, Tpz1, Poz1, Ccq1, Taz1などを同定した。免疫沈降実験およびtwo-hybrid assayにより、Pot1にTpz1が結合し、さらにTpz1にPoz1およびCcq1が結合することがわかった。さらに、Rap1はPoz1と直接結合することがわかった。様々な解析により、Taz1-Rap1-Poz1-Tpz1-Pot1という複合体が形成されている時には(二重鎖テロメアDNAが十分長い時)、テロメラーゼのテロメアへの作用が負に制御され、テロメアDNAはそれ以上伸びないようになり、上記の複合体が形成されない時には(二重鎖テロメアDNAが短い時)、Ccq1の働きによってテロメラーゼがテロメアに作用し、テロメアDNAが伸びると考えられた。

In eukaryotes, chromosome terminal structures exist, and important chromosome structures exist. The DNA sequence is the most terminal part of the DNA sequence and the inner part of the DNA sequence is the most terminal part of the DNA sequence. The DNA of a split yeast is linked directly to a single strand of DNA, and the DNA of a split yeast is linked directly to a single strand of DNA. This is the first time I've ever seen a woman. The molecular function of Rap1 is specified, and the interaction factor of Rap1 is determined. The quality of the supernatant was determined by mass spectrometry. The specific interaction factors of Rap1 are the same as Pot1, Tpz1, Poz1, Ccq1, Taz1. Immunosedimentation is a two-hybrid assay, Pot1, Tpz1, Poz1, Ccq1.さらに、Rap1はPoz1と直接结合することがわかった。Taz1-Rap1-Poz1-Tpz1-Pot1 complex is formed when the complex is formed.(When the double-locked DNA is very long), the effect of the temperature difference is negative control, the temperature difference is DNA extension, the complex is formed,(when the double-locked DNA is short), Ccq1 is temperature difference, the temperature difference is DNA extension.