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分裂酵母テロメアの維持機構と核内配置に関する研究

裂殖酵母端粒维持机制及核排列研究

基本信息

批准号：
17050013
负责人：
加納純子
金额：
$ 4.1万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17050013/
关键词：
テロメア分裂酵母細胞周期リン酸化 DNA複製ヘテロクロマチン HP1 RNAi

项目摘要

真核生物の線状染色体の末端に存在する構造体であるテロメアの維持機構を解明するため、分裂酵母のテロメアDNAに間接的に結合し、テロメアDNA長維持に必須であるRap1タンパク質の解析を行った。Rap1タンパク質の体細胞分裂細胞周期における制御機構を調べるため、まず初めにRap1タンパク質を野生株において過剰発現させたところ、細胞周期進行の著しい遅延が観察された。その遅延は、DNA損傷チェックポイントやRap1をテロメアヘリクルートする因子であるTaz1に非依存的であったことから、Rap1が細胞周期制御因子のターゲットとなっている可能性が示唆された。そこで、分裂酵母のCdc2複合体を免疫沈降したものを用いてin vitro kinase assayを行った。それにより、Rap1はSer(セリン)213、Thr(スレオニン)378、Ser422、Ser513においてCde2によってリン酸化される可能性が示唆された。Ser213のリン酸化を特異的に認識する抗体を作製したところ、Ser213はlate G2期からearly M期にかけてリン酸化されることがわかった。現在、他のリン酸化部位を認識する抗体を作製中である。Ser213をAla(アラニン)に置換したRap1タンパク質や、Ser513をGlu(グルタミン酸)に置換したRap1タンパク質を過剰発現させると、テロメアDNA長に異常が観察された。以上のことから、Rap1はCdc2によって細胞周期においてリン酸化され、それによってテロメアDNA調節機能が制御されている可能性が示唆された。

In eukaryotes, there is a complex at the end of the eukaryote chromosome, and it is necessary to analyze the molecular structure of the eukaryote, the combination of the mitotic yeast DNA, and the maintenance of the DNA in eukaryotes. The cell cycle of Rap1 spores is controlled by cell cycle monitoring, the control of cell cycle, the detection of wild plants, the detection of cell cycle, and the detection of cell cycle. In the case of cell cycle control factors, which are independent of Taz1, the cell cycle control factor, the cell cycle regulator, the cell cycle regulator, the cell cycle regulator The Cdc2 complex of Saccharomyces cerevisiae and Saccharomyces cerevisiae was immunized and purified by in vitro kinase assay. The possibility of acidification is indicated by the possibility of acidification, Rap1Ser, Thr, Thr, Ser422, Ser513, and the possibility of acidification. The specific antibodies against Ser213 acidizing agents are used as antigens, Ser213 late G2 phase, early M phase, acidifying agent, acidifying agent, and so on. At present, the acidified site is not affected by the antibody. Ser213