分裂酵母テロメアの維持機構と核内配置に関する研究

裂殖酵母端粒维持机制及核排列研究

• 批准号: 17050013
• 负责人: 加納 純子
• 金额: $ 4.1万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17050013/
• 关键词: テロメア; 分裂酵母; 細胞周期; リン酸化; DNA複製; ヘテロクロマチン; HP1; RNAi

真核生物の線状染色体の末端に存在する構造体であるテロメアの維持機構を解明するため、分裂酵母のテロメアDNAに間接的に結合し、テロメアDNA長維持に必須であるRap1タンパク質の解析を行った。Rap1タンパク質の体細胞分裂細胞周期における制御機構を調べるため、まず初めにRap1タンパク質を野生株において過剰発現させたところ、細胞周期進行の著しい遅延が観察された。その遅延は、DNA損傷チェックポイントやRap1をテロメアヘリクルートする因子であるTaz1に非依存的であったことから、Rap1が細胞周期制御因子のターゲットとなっている可能性が示唆された。そこで、分裂酵母のCdc2複合体を免疫沈降したものを用いてin vitro kinase assayを行った。それにより、Rap1はSer(セリン)213、Thr(スレオニン)378、Ser422、Ser513においてCde2によってリン酸化される可能性が示唆された。Ser213のリン酸化を特異的に認識する抗体を作製したところ、Ser213はlate G2期からearly M期にかけてリン酸化されることがわかった。現在、他のリン酸化部位を認識する抗体を作製中である。Ser213をAla(アラニン)に置換したRap1タンパク質や、Ser513をGlu(グルタミン酸)に置換したRap1タンパク質を過剰発現させると、テロメアDNA長に異常が観察された。以上のことから、Rap1はCdc2によって細胞周期においてリン酸化され、それによってテロメアDNA調節機能が制御されている可能性が示唆された。

Eukaryotes の linear chromosomes の end に exist す る constructs で あ る テ ロ メ ア の keep agency を interpret す る た め, split yeast の テ ロ メ ア DNA に indirect に し, テ ロ メ ア long DNA must maintain に で あ る Rap1 タ ン パ ク qualitative analytical line を っ の た. Rap1 タ ン パ ク qualitative の somatic cell division cell cycle に お け る system of the royal institution を adjustable べ る た め, ま ず early め に Rap1 タ ン パ ク qualitative を wild strains に お い て before turning 発 now さ せ た と こ ろ, cell cycle for の し い 遅 delay が 観 examine さ れ た. そ の 遅 delay は, DNA damage チ ェ ッ ク ポ イ ン ト や Rap1 を テ ロ メ ア ヘ リ ク ル ー ト す る factor で あ る Taz1 に of interdependent で あ っ た こ と か ら, Rap1 が cell cycle suppression factor の タ ー ゲ ッ ト と な っ て い が る possibility in stopping さ れ た. Youdaoplaceholder0 を で で, fission yeast <s:1> Cdc2 complex を, immune deposition <s:1> た <s:1> を を を を った using て てin vitro kinase assayを った. そ れ に よ り, Rap1 は Ser (セ リ ン) 213, Thr (ス レ オ ニ ン) 378, Ser422, Ser513 に お い て Cde2 に よ っ て リ ン acidification さ れ が る possibility in stopping さ れ た. Ser213 の リ ン acidification を specific に know す る antibody を cropping し た と こ ろ, Ser213 は newest G2 か ら early stage M に か け て リ ン acidification さ れ る こ と が わ か っ た. Now, he <s:1> リ <s:1> acidified site を recognizes する antibody を in production である. Ser213 を Ala (ア ラ ニ ン) に replacement し た Rap1 タ ン パ ク や, Ser513 を Glu (グ ル タ ミ ン acid) に replacement し た Rap1 タ ン パ ク qualitative を through turning 発 now さ せ る と, テ ロ メ ア abnormal DNA long に が 観 examine さ れ た. Above の こ と か ら, Rap1 は Cdc2 に よ っ て cell cycle に お い て リ ン acidification さ れ, そ れ に よ っ て テ ロ メ ア DNA adjust enginery が suppression さ れ て い が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

Structure of hnRNP D complexed with single-stranded telomere DNA and unfolding of the quadruplex by heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D

• DOI: 10.1074/jbc.m411822200
• 发表时间: 2005-05-13
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Enokizono, Y;Konishi, Y;Katahira, M
• 通讯作者: Katahira, M

Telomere-binding proteins in fission yeast.

裂殖酵母中的端粒结合蛋白。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Encyclopedia of Mol.Cell Biol.& Mol.Med. 14
• 作者: Nishiyama A.;Muraki K.;Saito M.;Ohsumi K.;Kishimoto T.;Ishikawa F.;Kanoh J.
• 通讯作者: Kanoh J.

Cell-cycle-dependent Xenopus TRF1 recruitment to telomere chromatin regulated by Polo-like kinase

• DOI: 10.1038/sj.emboj.7600964
• 发表时间: 2006-02-08
• 期刊: EMBO JOURNAL
• 影响因子: 11.4
• 作者: Nishiyama, A;Muraki, K;Ishikawa, F
• 通讯作者: Ishikawa, F

Telomere-binding protein establishes Swi6 heterochromatin independently of RNAi at telomeres.

端粒结合蛋白在端粒上独立于 RNAi 建立 Swi6 异染色质。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Curr.Biol. 15
• 作者: Kanoh J.;Sadaie M.;Urano T.;Ishikawa F.
• 通讯作者: Ishikawa F.

Tel2 is required for activation of the Mrcl-mediated replication checkpoint.

激活 Mrcl 介导的复制检查点需要 Tel2。

• 发表时间: 2007
• 期刊: The Journal of Biological Chemistry 282
• 作者: Shikata M.;Ishikawa F.;Kanoh J.
• 通讯作者: Kanoh J.