ホモFRETによる複数機能の可視化技術開発

使用homo-FRET开发多种功能的可视化技术

• 批准号: 19021002
• 负责人: 永井 健治
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19021002/
• 关键词: イメージング; FRET; 顕微鏡; 可視化

生体分子の機能を可視化するために波長の異なる2つの蛍光分子間で起こるFRET(ヘテロFRET)を利用した様々なプローブが近年開発されている。これらのFRETプローブは観察するための波長が広域であるため、他の蛍光プローブと同時に可視化することが難しい。そこで同一蛍光色分子間で生じるホモFRETを原理とするカルシウムセンサーW-cameleonを作成し、Ca^<2+>の有無での蛍光異方性を測定することが本研究の柱の1つである。今年度は昨年度作成したW-cameleonに様々な変異を導入することでダイナミックレンジの拡大化を行った。その結果、Ca^<2+>センサードメインであるCalmodulin内に蛍光タンパク質を挿入することで、より大きなダイナミックレンジを有するプローブを得ることに成功した。次に、作成したホモFRETプローブの蛍光異方性変化を顕微鏡下で高感度に観察するために、昨年度までに構築した蛍光偏光顕微鏡に改良を加えた。具体的には一片が5μm程度のフォトニック結晶製波長板と偏光板を組み合わせて、マルチアレー化した偏光解消補償板を開発し、対物レンズの後側焦点面に導入することで、高い消光比を得ることに成功した。これにより、対物レンズによる入射光の偏光解消が緩和され、僅かな蛍光異方性変化をも顕微鏡下で捉えることが可能になった。

The function of biological molecules can be visualized at different wavelengths, and the use of FRET(FRET) between molecules has been developed in recent years. This is the first time I've ever seen a person The principle of FRET is used to determine the optical anisotropy of Ca^<2+> and Ca^<2+>. This year's W-cameleon was created to increase the number of visitors. The result is that the Ca^<2+> content of the Ca2 + solution is very high, and the Ca2 + solution is very high. Second, the preparation of FRET optical anisotropy under the microscope, the construction of optical polarization microscope Specifically, a crystal wavelength plate of about 5μm and a polarizing plate are assembled, and the polarization compensation plate is opened, and the rear focal plane of the object is introduced. The polarization of incident light is relaxed, and the anisotropy of incident light is reduced.

项目成果

大口径ファイバー白色光源を用いた高速共焦点顕微鏡の開発と評価

大直径光纤白光源高速共焦显微镜的研制与评价

• 发表时间: 2007
• 期刊: 顕微鏡 42
• 作者: 齊藤健太;谷知己;小林健太郎;永井健治
• 通讯作者: 永井健治

新規の光変換蛍光蛋白質プローブを用いた生体イメージングと動態解析

使用新型光转换荧光蛋白探针进行生物成像和动态分析

• 发表时间: 2008
• 期刊: 蛋白質核酸酵素 53
• 作者: 松田知己;永井健治
• 通讯作者: 永井健治

Engineering fluorescent proteins to visualize and manipulate biological functions

工程荧光蛋白以可视化和操纵生物功能

• 发表时间: 2008
• 作者: Tomisaka;Y. ; Nomoto;A. ; Ogawa A.;Fumi Nagatsugi;Takeharu Nagai;小松紘一(代表);永次史;Takeharu Nagai
• 通讯作者: Takeharu Nagai

蛍光・化学発光タンパク質を利用して何ができるか?

我们可以用荧光和化学发光蛋白做什么？

• 发表时间: 2007
• 作者: 川口真一;小川昭弥;他3名;桑原俊介;永井健治
• 通讯作者: 永井健治

群青色蛍光タンパク質

群青荧光蛋白

• 发表时间: 2007