条件不安定化ヒト人工染色体を用いたセントロメア機能と核再形成の研究

使用条件不稳定的人类人工染色体研究着丝粒功能和核重塑

• 批准号: 19038011
• 负责人: 舛本 寛
• 金额: $ 5.7万
• 依托单位: Kazusa DNA Research Institute (2008)Nagoya University (2007)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19038011/
• 关键词: 細胞核; ヒト人工染色体; セントロメア

これまでの研究で、ヒトセントロメア由来アルフォイドDNAへのCENP-Bタンパク質の結合は、セントロメア特異的ヒストンH3であるCENP-Aの集合とヘテロクロマチン形成の両反応に関わることを明らかにした(Okada et al, Cell, 2007)。そこで本年度は、(1)tetオペレーター配列(tet0)を挿入した合成アルフォイドDNAを作成しヒト培養細胞へ導入して、この配列からなるヒト人工染色体(HAC)を作成し、セントロメア機能とヘテロクロマチンとの関連性について調べた。転写の強力なサイレンサーでありヘテロクロマチン様のヒストン修飾(トリメチル化ヒストンH3-K9 ; H3K9me3)を誘導するtTS(SD^<kid>とtetRの融合蛋白)をtet0に結合させると、tet0アルフォイドDNA上にH3K9me3が集合し、これに伴いキネトコアタンパク質は消失し、セントロメア機能がほぼ完全に消失することを発見した。HAC上のセントロメア・キネトコア機能がヘテロクロマチン化により阻害された場合、染色体分配機能が失われ、微小核を形成するが、セントロメア機能を無くした微小核は細胞からも速やかに排除されて行くことを明らかにした。(Nakano et al, 2008)(2)tet0アルフォイド配列がホスト染色体に挿入された場合、セントロメア機能が不活性化されるメカニズムについて調べることを目的として、野生型マウス胎児繊維芽細胞とCENP-Bノックアウトマウス胎児繊維芽細胞へtet0アルフォイド配列を導入し、異所的挿入株を作成した。tetR融合各種ヒストン修飾酵素やリモデリング因子を結合させた場合に不活性化が解除されるかどうかについて現在解析を進めている。

The reason for this is that the combination of DNA and CENP-B data sets, the collection of CENP-A data sets, and the formation of information devices (Okada et al, Cell, 2007). In the current year, (1) the tet equipment equipment (tet0) has been added to the synthesis system. The DNA has been made into a computer, and the artificial chromosome (HAC) has been made. This is the first time that the artificial chromosome (HAC) has been made. Write the H3-K9 (H3K9me3) guide tTS (SD ^ & lt;kid&gt). The tetR fusion protein (tet0) was combined with the H3K9me3 collection on the DNA, the H3K9me3 fusion protein, the H3K9me3 fusion protein, the On the HAC, the machine can block the fusion, the chromosome distribution mechanism can lose, the micronucleus can form, the micronucleus can be detected, and the micronucleus can be detected. (Nakano et al, 2008) (2) the chromosomes of the tet0 cells were inserted into the cell line, the chromosomes of the cells were inserted into the cell, and the cells of the wild type were not activated. The cells of the wild type were not activated, and the cells of the wild type were born. The cells of the embryo, the tet0, the cells, the cells. TetR fusion of all kinds of enzymes in combination with inactivation in combination with the combination of enzyme modification and inactivation is now in progress.

项目成果

セントロメア機能形成に関わるダイナミックなクロマチン集合バランス

着丝粒功能形成中涉及的动态染色质组装平衡

• 发表时间: 2008
• 作者: A. Shamma;Y. Takegami;T. Miki;S. Kitajima;M. Noda;T. Obara;T. Okamoto;C. Takahashi;神崎展;舛本 寛
• 通讯作者: 舛本 寛

CENP-B controls centromere formation depending on the chromatin context

• DOI: 10.1016/j.cell.2007.10.045
• 发表时间: 2007-12-28
• 期刊: CELL
• 影响因子: 64.5
• 作者: Okada, Teruaki;Ohzeki, Jun-Ichirou;Masumoto, Hiroshi
• 通讯作者: Masumoto, Hiroshi

Human gamma-satellite DNA maintains open chromatin structure and protects a transgene from epigenetic silencing

• DOI: 10.1101/gr.086496.108
• 发表时间: 2009-04-01
• 期刊: GENOME RESEARCH
• 影响因子: 7
• 作者: Kim, Jung-Hyun;Ebersole, Thomas;Larionov, Vladimir
• 通讯作者: Larionov, Vladimir

Inactivation of a human kinetochore by specific targeting of chromatin modifiers.

• DOI: 10.1016/j.devcel.2008.02.001
• 发表时间: 2008-04
• 期刊: DEVELOPMENTAL CELL
• 影响因子: 11.8
• 作者: Nakano, Megumi;Cardinale, Stefano;Noskov, Vladimir N.;Gassmann, Reto;Vagnarelli, Paola;Kandels-Lewis, Stefanie;Larionov, Vladimir;Earnshaw, William C.;Masumoto, Hiroshi
• 通讯作者: Masumoto, Hiroshi

セントロメア機能を不活性化できるヒト人工染色体

可以使着丝粒功能失活的人类人工染色体

• 发表时间: 2007
• 作者: Abdus;Samad;奥脇暢;永田恭介;久岡美晴;駒木一安・田加奈子;奥脇暢;Jung-Hyun Kim;中野 めぐみ;中野 めぐみ;舛本 寛;Megumi Nakano;Teruaki Okada;Yasuhide Okamoto;舛本 寛;舛本 寛;舛本 寛;舛本 寛
• 通讯作者: 舛本 寛