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ESCRT小胞輸送蛋白複合体によるレトロウイルス感染増殖制御

ESCRT 囊泡转运蛋白复合物控制逆转录病毒感染和增殖

基本信息

批准号：
19041067
负责人：
田中伸幸
金额：
$ 4.67万
依托单位：
Miyagi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19041067/
关键词：
小細胞輸送ユビキチン ESCRT ウイルスライソソーム小胞輸送

项目摘要

HIV-I Gag蛋白はキャプシド構成分子であり、単独で発現させるとウイルス様粒子(VLP)を形成し、それ自身が出芽(budding)する。小胞輸送蛋白複合体(ESCRT)の上流に位置する輸送蛋白HrsがEGF受容体等の分解制御に関わること、同じくESCRTに含まれるTsg101(ESCRT-I)である及びVps4がHIVの出芽に重要であることが報告された。Gagはユビキチン化修飾を受けることが知られており、これまで詳細不明であった「ユビキチン化されたGagの認識・輸送機構」の存在も想定された。Hrsはユビキチン結合ドメイン(UIM)を持つほか、エンドソーム上にTsg101をリクルートする機能があることから、Gagの認識・輸送にHrsが関与する仮説を立て、Gagの細胞内輸送及び分解に果たすHrsの役割を検討した。siRNAを用いHrsをノックダウンしたHeLa細胞にHIV-I gagを遺伝子導入し、細胞内のGag蛋白量及び培養上清中のVLPをウエスタンブロッティング、ELISA法にて検討した。その結果、Hrsノックダウンにより、細胞内のGag蛋白量が顕著に増加し、培養上清中のVLP量も有意に増加した。ライソソーム阻害剤存在下で細胞内Gagの分解を調べたところ、Hrsノックダウン細胞と同様に分解が抑制された。共焦点顕微鏡下で、GagとCD63の共局在がみられたが、HrsノックダウンによってGagとCD63の共局在が顕著に増加した。一方、Hrsノックダウン時に蓄積するGagはSNARE蛋白のうちSTX6およびSTX8によって有意に蓄積が解除された。以上の結果から、1)Gag蛋白はライソソームで分解されること、2)分解にHrsが必須であること、3)SNAREによってGagがライソソーム分解に誘導されることがわかった。

HIV-I Gag protein is composed of molecular components, individual components, individual components, and VLP components. The upstream position of the vesicular transport protein complex (ESCRT) is related to the regulation of the breakdown of EGF receptors, including Tsg101 (ESCRT-I) and Vps4. Gag's understanding of the existence of transmission mechanism is unknown. Hrs is a combination of Hrs (UIM), Hrs (UIM), Hrs (UIM) siRNA was used to detect HIV-I gag gene expression in HeLa cells, the amount of Gag protein in HeLa cells and VLP in culture supernatant. As a result, the amount of Gag protein in cells increased significantly, and the amount of VLP in culture supernatant increased significantly. In the presence of a good inhibitor, the decomposition of intracellular Gag is regulated and inhibited. In the confocal microscope, Gag and CD63 are in the same position, and Gag and CD63 are in the same position One side, Hrs, when it accumulates, Gag, SNARE protein, STX6 and STX8, intentionally accumulates and releases it. The results are as follows: 1)Gag protein is decomposed properly; 2) Hrs must be decomposed; 3)SNARE is decomposed properly.

项目成果

期刊论文数量（11）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Clathrin-dependent Entry of SARS Coronavirus into Target Cells Expressing Cytoplasmic Tail-deleted ACE2.

SARS 冠状病毒依赖网格蛋白进入表达细胞质尾部缺失 ACE2 的靶细胞。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
J Virol. 81
影响因子：
0
作者：
Inoue Y;Tanaka N;Tanaka Y;Inoue S;Morita K;Min Z;Hattori T;Sugamura K.
通讯作者：
Sugamura K.

Inhibition of tumor growth and metastasis by depletion of vesicular sorting protein Hrs: its regulatory role on E-cadherin and beta-catenin.

通过消耗囊泡分选蛋白 Hrs 抑制肿瘤生长和转移：其对 E-钙粘蛋白和 β-连环蛋白的调节作用。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Cancer Res. 67
影响因子：
0
作者：
Toyoshima M;Tanaka N;Aoki J;Tanaka Y;Murata K;Kyuuma M;Kobayashi H;Ishii N;Yaegashi N;Sugamura K.
通讯作者：
Sugamura K.

Negative regulation of LL-6 signaling c-Cbl-dependent Monoubiquitin action and Lysosomal Degradation of gp130

LL-6 信号传导 c-Cbl 依赖性单泛素作用和 gp130 溶酶体降解的负调节

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kyuuma;Y;Tanaka;N. ほか;Fukui Y;Tanaka N
通讯作者：
Tanaka N

Role of Hrs in Maturation of Autophagosomes in Mammalian Cell.

Hrs 在哺乳动物细胞自噬体成熟中的作用。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Biochem Biophys Res Commun. 360
影响因子：
0
作者：
Tamai,K;Tanaka;N.;Nara;A;Yamamoto,A Nakagawa;I.;Yoshimori;T. Ueno;Shimosegawa;T;and Sugamura K.
通讯作者：
and Sugamura K.

Loss of Hrs in the Central Nervous System Causes Accumulation of Ubiquitinated Proteins and Neurodegeneration