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遺伝子ノックアウトを用いた新規クラスE分子群による小胞輸送の研究

利用基因敲除研究新型 E 类分子的囊泡运输

基本信息

批准号：
16044203
负责人：
田中伸幸
金额：
$ 3.97万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

エスコートに分類される輸送関連Hrsの機能解析を行う目的で、ノックアウトマウスからHrs欠損マウス由来不死化細胞株を樹立した。EGF受容体の分解と細胞内コンパートメント動態を検討した。cycloheximide存在下においてタンパク分解の時間経過を観察したところ、Hrs欠損細胞において受容体分解が有意に遅延しシグナル伝達の継続時間の延長が認められた。HrsはIL-2によりSTATと同様にチロシンリン酸化を受ける蛋白であることから、サイトカイン受容体と小胞輸送を結びつける分子群であることが予想された。Hrsノックアウト細胞およびSTAM1/STAM2ダブルノックアウト線維芽細胞株をIL-6で刺激したところ、STAT3活性化が長時間持続した。gp130はIL-6非依存性の状態においてプロテアソームおよびライソソーム系による分解を受けるが、IL-6刺激後の挙動はライソソーム系による分解が主であった。Hrsはgp130のライソソーム依存性分解を制御していた。IL-6刺激後のgp130の細胞内トラフィック動態を検討したところ、IL-6刺激後早期にインターナライズされ早期エンドソーム(EE)に輸送され、STAMs/Hrs複合体と一過性に共局在した。STAM/Hrsはユビキチン結合性ドメイン(UIM,VHS)を持ちユビキチン化蛋白(Cargo)を認識することからgp130のユビキチン化を検討したところポリユビキチン化・モノユビキチン化の両者からなる修飾を受けていた。したがってSTAMs・Hrs複合体はEE経由のgp130分解に関与し、最終的にリソソーム依存性受容体分解とシグナル停止に関与していた。

エスコートに classification される conveying masato even Hrs の function analytical line をでう purpose, ノックアウトマウスから Hrs owe loss マウス origin die change cell lines を set した. EGF receptor <s:1> decomposes と intracellular コパパトメトメトトトト dynamics を検 seek たた. The presence of cycloheximide においてタンパのク decomposition time 経を観 examine したところ, Hrs owe damage cells において by decomposition が intentionally let body に遅 delay しシグナル伝 da の継続の prolonged が recognize められた. Hrs は IL - 2 により STAT と with others にチロシンリン acidification を by ける protein であることから, サイトカイン by let body と vesicular transport を "びつける molecular group of であることが to think された. Hrs ノックアウト cells および STAM1 / STAM2 ダブルノックアウト line d bud cell lines を IL - 6 で stimulus したところ, STAT3 activity が long hold 続した. Gp130 は IL - 6 non state dependence のにおいてプロテアソームおよびライソソーム department によをる decomposition by けるが, IL - 6 stimulation の挙 dynamic はライソソーム department による decomposition が main であった. Hrs ラ gp130 ララソソムム dependency decomposition を control たてたたた. IL - 6 stimulation の gp130 の intracellular トラフィック dynamic を beg し検たところ, IL - 6 stimulation early にインターナライズされ early エンドソーム (EE) に conveying され, STAMs/Hrs complex と transient に total bureau in した. STAM/Hrs はユビキチン associativity ドメイン (UIM, VHS) を hold ちユビキチン mineralization protein (Cargo) を know することから gp130 のユビキチン change を beg し検たところポリユビキチン change · モノユビキチン change の struck the からなる modified を by けていた. したがって STAMs, Hrs complex は EE 経 by の gp130 decomposition に masato and し, final にリソソーム dependence by let body decomposition とシグナル stop に masato and していた.