UV照射後に活性化されるCul4-DDB1-Cdt2によるCdt1分解機構の解析

紫外线照射后激活的Cul4-DDB1-Cdt2降解Cdt1的机制分析

• 批准号: 20012047
• 负责人: 西谷 秀男
• 金额: $ 6.27万
• 依托单位: University of Hyogo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20012047/
• 关键词: DNA損傷; タンパク質; 分解; ユビキチン; 細胞周期; がん; ゲノム

我々は、染色体の再複製抑制機構の研究からライセンス化因子Cdt1は、そのN末端にPCNA結合部位を持ち、複製に伴いPCNAが染色体に結合すると、Cu14-DDB1^<Cdt2>によりユビキチン化を受け分解されることを報告した。このCu14-DDB1^<Cdt2>によるCdt1の分解は、UV照射などのDNA傷害を受けた場合にも、同様に誘導される。本研究では、Cu14-DDB1^<Cdt2>複合体の修飾による制御、DNA損傷とCdt1の分解の関連性を検討した。1) Cdt2は、Cdt1の分解に関わるS期において高度にリン酸化されている。同様に、UV照射後のCdt2のリン酸化を調べたところ、UV強度に依存してリン酸化されることを明らかにした。この場合のCdt1の分解はG1期に起こるが、実際G1期においてCdt2のリン酸化が認められた。ATM/ATRチェックポイントキナーゼの阻害剤カフェインやMAPキナーゼインヒビターにより、リン酸化の低減が見られたので、これらのキナーゼの関与が示唆された。2) 3-5マイクロメーターのボアを持つメンブレンを用いて、細胞の核に局所的にUVを照射し、Cdt1, Cdt2, PCNAのDNA損傷部位への集積を調べた。UV照射10分後には、これらの分子の損傷部位への集積が観察された。その後、Cdt1の核内シグナルは消失した。PCNAをサイレンシングすると、Cdt1やCdt2の集積見られなかった。従って、Cdt1は、PCNA依存的にDNA損傷部位に集積後、同様に集積したCu14-DDB1^<Cdt2>によりユビキチン化を受け、分解されると結論した。

We report on the mechanism of chromosome replication inhibition, including the N-terminal PCNA binding site and the replication site associated with PCNA binding<Cdt2>. The decomposition of Cu14-DDB1 <Cdt2>was induced by UV irradiation and DNA damage. In this study, we investigated the relationship between the inhibition of modification of Cu14-DDB1^<Cdt2>complex, DNA damage and Cdt1 decomposition. 1)Cdt2 and Cdt1 are decomposed in the S phase and highly acidified in the S phase. In the same way, the UV irradiation of Cdt2 is dependent on the UV intensity. In this case, the decomposition of Cdt1 starts from G1 period, and the acidification of Cdt2 starts from G1 period. ATM/ATR 2)3-5. UV irradiation, Cdt1, Cdt2, PCNA and DNA damage accumulation in the nucleus of cells are modulated by UV irradiation. After 10 minutes of UV irradiation, the accumulation of molecular damage sites was observed. After the death of Cdt1, the nuclear system disappeared. PCNA, Cdt1 and Cdt2 are integrated. The results showed that the accumulation of DNA damage sites dependent on PCNA and Cdt1 was similar to that of Cu14-DDB1, and the accumulation of DNA damage sites dependent on PCNA was similar to that of Cdt1<Cdt2>.

项目成果

紫外線に応答したヒトCul4-DDB1-Cdt2による細胞周期関連因子のユビキチン化と分解機構

人Cul4-DDB1-Cdt2响应紫外线对细胞周期相关因子的泛素化和降解机制

• 发表时间: 2009
• 作者: 塩見泰史;他
• 通讯作者: 他

STUDY OF IN VITRO UBIQUIT-NATION OF HUMAN CDT1 AND P21 BYCITL4-DDB1-CDT2 COMPLEX

人CDT1和P21 BYCITL4-DDB1-CDT2复合物的体外泛素化研究

• 发表时间: 2009
• 作者: 石井健士;他;Yasushi Shiomi
• 通讯作者: Yasushi Shiomi

DNA損傷部位へのCul4/DDB1/Cdt2複合体の基質認識サブユニットCdt2の局在化

Cul4/DDB1/Cdt2 复合物的底物识别亚基 Cdt2 定位于 DNA 损伤位点

• 发表时间: 2009
• 作者: 石井健士;塩見泰史;大西奈保;西谷秀男
• 通讯作者: 西谷秀男

CDK inhibitor p21 is degraded by a PCNA coupled Cu14-DDB1 Cdt2 pathway during S phase and after UV irradiation.

CDK 抑制剂 p21 在 S 期和紫外线照射后被 PCNA 偶联的 Cu14-DDB1 Cdt2 途径降解。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Biol Chem 283
• 作者: Nishitani H.;et.al.
• 通讯作者: et.al.

START-GAP2/DLC2 is localized infocal adhesions via its N-teminal region

START-GAP2/DLC2 是通过其 N 末端区域进行的局部信息粘连

• 发表时间: 2009
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun 380
• 作者: Kawai K;et al
• 通讯作者: et al