タンパク質分解による複製のライセンス化制御

通过蛋白水解进行复制的许可控制

• 批准号: 20058030
• 负责人: 西谷 秀男
• 金额: $ 5.12万
• 依托单位: University of Hyogo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20058030/
• 关键词: 細胞周期; タンパク質; 分解; ユビキチン; タンパクー質

ほ乳動物細胞において、染色体複製のライセンス化因子Cdt1は、再複製を抑制するためS期開始以降はユビキチン化を受け分解される。一方、我々は、Cdt1はM期中期に安定に存在することを見出した。この安定化は、次の細胞周期のためのライセンス化がM期終期からG1期初期に素早く確立するために重要であると考えている。M期では、Cdt1は高度にリン酸化されており、Cdt1のM期における安定化に関わると考え解析を行なった。Cdt1-FLAGを安定に発現するHeLa細胞を同調して、M期とS期よりCdt1タンパク質を精製した。質量分析によりリン酸化部位の決定を行ない、M期に特異的に見られる、あるいはS期に比べてM期に顕著にリン酸化が起こっていると思われる部位をCdt1タンパク質全体にわたって検出した。しかしながら、ユビキチンリガーゼSCF-SKp2の認識に必要な29番目のT(スレオニン)および31番目のS(セリン)のリン酸化は検出されなかった。また、M期においてサイクリンA-cdkとCdt1の結合が低下していることを考え合わせ、サイクリンA-cdkの結合部位(Cy部位)近傍のリン酸化が、安定化に関与していると予想した。そこで、Cy部位近傍で検出された4カ所のTあるいはSをアラニン(A)に変異させ安定化を調べた。また、リン酸化部位の配列から、Plk1によるリン酸化が予想された。そこで、リン酸化部位のアラニン変異とsiRNAによるPlk1のサイレンシングを組み合わせて解析を行なったところ、Cdt1のM期安定化の低下が見られた。よって、いくつかのキナーゼによるリン酸化が、Cdt1の安定化に関わると結論した。

In dairy animals, chromosome replication is inhibited by Cdt1, which begins to degrade chromosome replication. A party, I, Cdt1 and M period stability exists, see out The stability of the cell cycle is important for the early establishment of the final phase of the G1 phase. M phase, Cdt1 high acidification, Cdt1 M phase, stabilization, analysis Cdt1-FLAG is stable, and HeLa cells are in tune, M and S phases. Mass analysis of the acid site determination, M phase of the specific see, S phase than M phase of the acid site determination For the understanding of SCF-SKp2, it is necessary for T(S) and S(S) of 29 items and 31 items to be acidified. The binding between A-cdk and Cdt1 in phase M is lower than that in phase M. The binding between A-cdk and Cdt1 is lower than that in phase M. The binding between A-cdk and Cy is lower than that in phase M. In the vicinity of Cy and Cy, the T of 4 points is changed to S, and the T of 4 points is changed to S. The position of the acid site is arranged in the order of Plk1 and Plk 2. The decrease of M-phase stabilization of Plk1 and Cdt1 was observed in the presence of siRNAs in different parts of Plk1. In addition, the results show that Cdt1 is stable and stable.

项目成果

紫外線に応答したヒトCul4-DDB1-Cdt2による細胞周期関連因子のユビキチン化と分解機構

人Cul4-DDB1-Cdt2响应紫外线对细胞周期相关因子的泛素化和降解机制

• 发表时间: 2009
• 作者: 塩見泰史;他
• 通讯作者: 他

START-GAP2/DLC2 is localized in focal adhesions via its N-terminal Oregion

START-GAP2/DLC2 通过其 N 端 O 区域定位于粘着斑

• 发表时间: 2009
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun 380
• 作者: Kawai K;et al
• 通讯作者: et al

STUDY OF IN VITRO UBIQUITINATION OF HUMAN CDT1 AND P21 BY CUL4-DDB1-CDT2 COMPLEX

CUL4-DDB1-CDT2复合物对人CDT1和P21的体外泛素化研究

• 发表时间: 2009
• 作者: 塩見泰史;et al
• 通讯作者: et al

Polycomb-group complex 1 acts as an E3 ubiquitin ligase for Geminin to sustain hematopoietic stem cell activity

• DOI: 10.1073/pnas.0800672105
• 发表时间: 2008-07-29
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Ohtsubo, Motoaki;Yasunaga, Shin'ichiro;Takihara, Yoshihiro
• 通讯作者: Takihara, Yoshihiro

CDK inhibitor p21 is degraded by a PCNA coupled Cu14-DDB1Cdt2 nathwav rinrinu S nhase and after UV irradiation

CDK 抑制剂 p21 在 UV 照射后被 Cu14-DDB1Cdt2 nathwav rinrinu S nhase 偶联的 PCNA 降解

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Biol. Chem 283
• 作者: Nishitani H;et.al.
• 通讯作者: et.al.