染色体複製のライセンス化異常と細胞のガン化

许可染色体复制异常和细胞癌变

• 批准号: 12213099
• 负责人: 西谷 秀男
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213099/
• 关键词: ゲノムサイズ; 複製; ライセンス化; ガン; 細胞周期; cdt1; cdc18

細胞当たりのゲノムサイズを一定に維持する制御機構として、一細胞周期に染色体の複製を一回に保証する"複製のライセンス化制御"が知られている。研究代表者は、分裂酵母において、cdc18とcdt1を高発現させると過剰複製が誘導されたことから、両遺伝子がライセンス化制御において中心的役割を担っていることを明らかにした。本研究では、その成果を高等動物細胞に発展させ、ガン細胞における染色体数の増加と過剰複製の関連を調べるべく、ヒトCdt1遺伝子のクローニングを行った。ショウジョウバエと分裂酵母のcdt1遺伝子をもとに、ヒトESTデータベースより相同性のあるクローンを見つけ、ラムダファージライブラリーより全長を含むcDNAをクローニングした。同時に、大腸菌に発現させたタンパク質を用い抗体の作製を行った。ウエスタン法で、ヒトHeLaおよびKB細胞で65kDaのバンドを認識した。得られたヒトCdt1cDNAをCos7細胞に発現させると65kDaのタンパク質が高発現されたので、全長のヒトCdt1cDNAがクローニングされたと結論した。続いて、細胞周期でのヒトCdt1タンパク質の発現を調べた。ダブルチミジン法により作製した同調培養では、ヒトCdt1タンパク質は、G1期中期にその量がピークとなり、S期開始後は、速やかに消失することが認められた。DNA合成阻害剤であるアフィデイコリンやヒドロキシ尿素でS期初期に止めた状態では、すでにヒトCdt1タンパク質は検出できなかった。ノーザン法では、ヒトCdt1mRNAの発現は細胞周期を通じて検出されたのでヒトCdt1タンパク質は、S期開始後は、速やかに分解されると予想された。以上の結果より、ヒトCdt1タンパク質は、複製のライセンス化が行われるG1期にのみ蓄積し、S期開始後は消失しており、その量は再複製を防止するうえで合目的に制御されていると考えられた。

The control mechanism of chromosome replication in cell cycle is to ensure the maintenance of chromosome replication. The representative of the research team is responsible for the high level of development of yeast, cdc18 and cdt1, and the high level of replication of yeast, cdc 18 and cdt 1. The results of this study are as follows: 1. The relationship between the development of higher animal cells and the increase of chromosome number and replication in cells is regulated by the gene expression of Cdt1. The cdt1 gene of the cDNA fragment is encoded in the cDNA fragment, and the cDNA fragment is encoded in the cDNA fragment. At the same time, E. coli was detected and the antibody was produced. The 65kDa protein in HeLa and KB cells is recognized by the following methods: The results showed that Cdt1 cDNA was expressed in Cos7 cells at a high level, and the full-length Cdt1 cDNA was expressed at a high level. The cell cycle is regulated by the regulation of cell cycle development. The first step is to establish a system of isochronous culture, and the second step is to establish a system of isochronous culture. DNA synthesis inhibition is the first step in DNA synthesis. The expression of Cdt1 mRNA in the cell cycle is expected to increase after the start of the S phase. The above results show that the quality of the product is low, the quantity of the product is low, and the quantity of the product is low.

项目成果

H.Nishitani et al.: "The cdt1 proteinis required to license DNA for replication in fission veast."Nature. 404. 625-628 (2000)

H.Nishitani 等人：“需要 cdt1 蛋白来许可 DNA 在裂变病毒中复制。”《自然》。

H.Nishijima et al.: "Premature Chromatin condensation caused by loss of RCC1."Progress Cell Cycle Research.. 4. 145-156 (2000)

H.Nishijima 等人：“RCC1 丢失导致染色质过早凝结。”细胞周期研究进展.. 4. 145-156 (2000)

西谷秀男: "細胞周期がわかる・染色体DNA複製を制御するライセンス化因子"羊土社.. 124-129 (2001)

Hideo Nishitani：“了解控制染色体 DNA 复制的细胞周期和许可因素”Yodosha.. 124-129 (2001)