機能付加型の癌特異的複製型ヘルペスウイルスベクターの基礎開発

具有附加功能的癌症特异性复制疱疹病毒载体的基础开发

基本信息

批准号：
20015013
负责人：
藤堂具紀
金额：
$ 7.04万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20015013/
关键词：
癌ウイルスバイオテクノロジーゲノム遺伝子

项目摘要

本研究は、ウイルスゲノムを遺伝子工学的に改変して癌細胞で選択的に複製する単純ヘルペスウイルスI型(HSV-1)ベクターに直接免疫刺激遺伝子などの外来遺伝子を挿入し、ウイルス複製に伴う直接的な殺細胞効果に加え特別な機能を有する次世代の癌特異的増幅型ベクターの基礎開発を目的とした。治療域の広い増殖型第三世代HSV-1のG47Δを基本骨格として用い、BACプラズミドと2つの組換え酵素系を利用して、任意の外来遺伝子をHSV-1ゲノムに容易かつ的確に組み込むことができる独自の作製システムを活用した。腫瘍特異性の高い抗腫瘍免疫惹起型のHSV-1開発を目的に、可溶型マウスB7-1を発現するHSV-1(T-mB7.1-Ig)を作製した。HSV-1に感受性の高いA/Jマウスに、低免疫原性のNeuro2a神経芽腫細胞を植えた皮下腫瘍モデルで評価を行ったところ、T-mB7.1-Igは低用量の腫瘍内投与でも、対照ウイルスT-01に比べ高い抗腫瘍効果を示した。更に、基質依存的に発光するCBRルシフェラーゼを発現する遺伝子組換えHSV-1を作製した。CMVプロモータとHSV-1の後期発現型プロモータを用い、感染後すぐに発現が得られるタイプと、ウィルスの複製が開始してから発現が得られるタイプの2種類を作製したところ、前者のHSV-1(T-luc)の方が格段に高いルシフェラーゼ発現を示した。さまざまな経路でT-lucをマウスに投与した後にIVISで観察し、遺伝子組換えHSV-1の体内動態を追跡した。機能付加型HSV-1を活用し、さまざまながんに対するウイルス療法の治療効果向上と最適化を目指していく。

这项研究旨在开发下一代癌症特异性扩增向量的基础知识，这些载体在存在的存在下具有特殊功能的单纯疱疹病毒I型（HSV-1）载体，该媒介使用对病毒基因组进行遗传修饰的基因修饰，并在癌细胞中选择性地复制癌细胞，并在癌细胞中选择性地将癌细胞插入癌细胞中，并将其插入癌症中。使用具有广泛的治疗区域的广泛的第三代HSV-1的G47δ作为基本的骨干，我们使用了独特的生产系统，该系统允许使用BAC质粒和两个重组酶系统将任何外国基因易于准确地整合到HSV-1基因组中。为了开发具有高肿瘤特异性的抗肿瘤诱导的HSV-1，制备了表达可溶小鼠B7-1的HSV-1（T-MB7.1-Ig）。当在皮下肿瘤模型中进行评估，其中A/J小鼠对HSV-1高度敏感的HSV-1具有低免疫原性神经2A神经母细胞瘤细胞时，即使在低剂量的肿瘤内给药时，T-MB7.1-Eig即使对照病毒T-01也会显示出比对照病毒T-01更高的抗肿瘤作用。此外，制备了发射底物依赖性发光的重组HSV-1表达CBR荧光素酶。使用CMV启动子和HSV-1的晚期表达启动子，准备了两种类型：一种可以在感染后立即表达的类型，一种可以在病毒复制开始后表达的类型，而前者的HSV-1（T-LUC）显示出明显更高的荧光素酶表达。 T-Luc通过各种途径对小鼠施用，并通过IVI跟踪转基因的HSV-1。使用附加的功能性HSV-1，我们旨在改善和优化各种癌症病毒疗法的治疗效果。