カルシウムチャネルの局在と機能を制御する膜複合体の解析

控制钙通道定位和功能的膜复合物的分析

基本信息

批准号：
20056009
负责人：
大塚稔久
金额：
$ 3.01万
依托单位：
University of Yamanashi (2009)University of Toyama (2008)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20056009/
关键词：
シナプス神経チャネル ELKS CAST アクティブゾーン神経伝達物質放出 RIM1

项目摘要

学習や記憶などの脳の高次機能は、神経シナプスにおける情報伝達が適切に行われることで成り立っている。神経シナプスのアクティブゾーンを構成する骨格タンパク質としてはCAST, ELKS, Bassoon, Piccolo, RIM1, Munc13-1などが知られている。一方で、神経終末へのカルシウムイオンの流入を制御するカルシウムチャネルも、アクティブゾーンにおいて重要な役割を担っている。すでにCASTおよびカルシウムチャネルがin vitroで複合体を形成していることを明らかにしている。本年度は、生体内における結合を明らかにするために免疫沈降実験の検討を行った。ラット大脳ホモジネートを可溶化し、カルシウムチャネルbetaサブユニットを用いた抗体で免疫沈降実験を行ったところ、CASTが共沈することが明らかとなった。一方、ショウジョウバエでは、カルシウムチャネルalphaサブユニットがCASTと直接結合することが報告されていたが、高等動物のCASTとカルシウムチャネルalphaサブユニットの結合は免疫沈降実験においては明らかにできなかった。ファミリーメンバーELKSのコンディショナルノックアウト(flox)を作製済みであり、今後、成熟した脳においてCreを発現するマウスとの交配を開始する。最終的には、CAST/ELKSダブルノックアウトマウスを作製し、カルシウムチャネルの局在および機能異常を総合的に解析する。

高阶大脑功能（例如学习和记忆）由神经突触的适当信息传输组成。构成神经突触的活跃区域的已知骨骼蛋白包括铸造，麋鹿，巴松管，Piccolo，RIM1和Munc13-1。另一方面，控制钙离子涌入神经末端的钙通道在活动区中也起着重要作用。已经证明，铸造和钙通道在体外形成复合物。今年，我们研究了免疫沉淀实验，以阐明体内结合。当将大鼠脑匀浆溶解并使用钙通道β亚基进行抗体进行免疫沉淀实验时，据揭示了将铸造共沉淀的铸件。另一方面，据报道，钙通道α亚基直接与果蝇中的铸造结合，但是在免疫沉淀实验中，铸件和钙通道α亚基的结合尚不清楚。已经生产了有条件的家庭成员麋鹿（Flox）敲除（Flox），并将开始与成熟大脑中表达Cre的小鼠交配。最后，产生铸造/麋鹿双基因敲除小鼠，以全面分析钙通道定位和功能障碍。