フィトクロームによる植物遺伝子の発現制御機構の解明

阐明光敏色素对植物基因表达的控制机制

基本信息

批准号：
63621508
负责人：
竹葉剛
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyoto Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63621508/
关键词：
レタスグルタミン合成酵素遺伝子フィトクローム

项目摘要

[結果](1)レタス芽生えからSarcosyl法により得たDNAをSau3AIを用いて部分分解し、λEMBL3をベクターとしてgenomic libraryを作製した。レタスGScDNAをプローブとしてスクリーニングした結果、positive clone2個を得た。mapping,southernにより全コード領域を含むことが確認できたクローンからブラスミドpUC118/119にサブクローンし、その塩基配列を決定した。その結果、レタスGSのコード領域は11のintronに分断されていることが判明した。遺伝子の発現制御に関係すると考えられる5'側領域には、TATA boxの他いくつかのdirectまたはinverted repeatが見出されたが、RuBisCO/ss遺伝子で光に感応すると報告されている配列や、フィトクローム依存遺伝子に多く見出される配列(CCTTATCAT)は、レタスGS遺伝子には見出すことができなかった。(2)レタス種子中で光照射後に合成されるGSmRNAの存在部位を知る目的で、insitu hybridizationを行なった。発芽直前の吸水種子から凍結切片を作製し、GScDNAをプローブとしてhybridizeしたところ、胚軸・子葉とも反応したが、特に表皮細胞が強く反応した。(3)リポキシゲナーゼについては、フィトクロームの効果がGSmRNA量の差として明確に観察される時期のレタス吸水種子からRNAを抽出し、Northernを行なったが、光による差を観察することができなかった。リポキシゲナーゼには多くのアイソザイムが存在するので、それらの知見が集積しつつあるダイズに材料を変更して、光の効果を調べている。

[结果]（1）使用sau3ai部分分解了从sarcosyl方法获得的DNA，并使用λembl3作为载体制备了基因组文库。将生菜GSCDNA筛选为探针产生了两个正克隆。该克隆被确认通过映射和南部包含整个编码区域，并将其亚克隆到Brasmid PUC118/119中，并确定基础序列。结果，发现生菜GS的编码区域分为11个内含子。在5'区域中发现了塔塔盒中的几个直接或倒反转的重复序列，该区域被认为与基因表达控制有关，但在rubisco/ss基因或序列中，在植物依赖性依赖性基因（CCTTATCAT）中通常没有序列在lettuce gs Gene中发现了光敏的序列。（2）进行液化杂交，以找出在生菜种子中光照射后合成的GS mRNA的位置。在发芽前从吸水种子中制备冷冻切片，并使用gscDNA作为探针进行杂交，尽管低鞘基酯和子叶叶叶有反应，但表皮细胞特别反应。（3）关于脂氧酶，从生菜吸收种子中提取RNA，在清楚地观察到植物色素的作用是GS mRNA含量的差异并进行了北部，但无法观察到北部的差异。由于脂氧合酶中存在许多同工酶，因此我们将材料更改为大豆，在那里这些发现越来越多地积累，并研究了光的作用。