光および植物ホルモンによるグルタミン合成酵素誘導機構の解明

阐明光和植物激素诱导谷氨酰胺合成酶的机制

• 批准号: 61229009
• 负责人: 竹葉 剛
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61229009/
• 关键词: 光発芽; グルタミン合成酵素; 光誘導; cDNAライブラリー; 遊離核転写系

1.レタスの発芽調節に関する従来のデータを再整理し、また、必要な実験結果を追加することにより、環境因子(光・温度)および植物ホルモンによる発芽調節機構を示すモデルを発表した。(第5回日米セミナー・ハワイ)。2.光照射したレタス吸水種子からmRNAを調製し、Gubler Hoffman法によりcDNAを合成した。これを用いて、pUC9ベクターによるcDNAライブラリー(【10^5】コロニー)、λgt11によるライブラリー(5×【10^5】プラーク)を作製した。プラスミドライブラリーには合成オリゴヌクレオチドを用い、またλgt11ライブラリーに対してはGS抗体を用いてスクリーニングしたところ、それぞれ複数のポジティブクローンを得た。現在、それらの構造を解析中である。3.遺伝子の発現機構を解明するためには、in vitro転写系を確立することが必要であるが、植物ではまだ完全な系は実現していない。そのため、遊離核レベルの転写系を確立した。光照射したレタス吸水種子からpercollグラジェント法で核を単離し、〔3,5-T〕UTPを取り込ませたところ、高い転写活性を示した。現在、上記2で得たGSクローンcDNAとハイブリッドするRNAを検出している。この系は今後「光誘導因子」のassay系として役立つものと思われる。4.光誘導を受ける植物酵素(Rubis CO,chal cone synthase等)の遺伝子では5′側に「光依存調節領域」の存在することが判明している。レタス吸水種子で、GS以外に光誘導される遺伝子が見つかれば、それらに共通する構造上の特徴が研究できるものと考え、differential hybridization法により、その検出を行なった。その結果、コロニー約1000に対し1個の割合で、光条件でのみ検出できるクローンを少なくとも数個分離することができた。現在、それらの性質を調べている。

1. The adjustment of the レタスの発buds, the adjustment of the buds, the のデータを rearrangement, the necessary な実験 result を addition of the することにより, environmental factors (light and temperature) および plant ホルモンによる発 bud regulating mechanism をshow すモデルを発 table した. (The 5th episode of Himiセミナー・ハワイ). 2. Light irradiation is used to absorb water from seeds and mRNA is prepared, and Gubler Hoffman method is used to synthesize cDNA.これを用いて、pUC9ベクターによるcDNAライブラリー(【10^5】コロニー), λgt11によるライブラリー(5×【10^5】プラーク)をした.プラスミドライブラリーには synthesizes オリゴヌクレオチドを with い, またλgt11ライブラリーに対The anti-GS antibody is obtained from the いてスクリーニングしたところ, それぞれplural のポジティブクローンをた. Now, the structure of the structure is being analyzed. 3. The legacy of the legacy of the deceased child The in vitro writing system することがnecessary であるが, the plant ではまだcomplete な system は実appears していない.そのため、The free core レベルの転WRITING system をestablished した. Light irradiation したレタス water-absorbing seeds からpercoll グラジェント法 でnuclear を単し、〔3,5-T〕UTPをtake り込ませたところ、高い転WRITE active をshow した. Now, the above mentioned 2. GS クローンcDNA とハイ ブリッドするRNA を検出している. In the future, "Light Inducible Factor" will be used as a test of the Assay System. 4. The existence of "light-dependent regulation field" on the 5' side of light-induced plant enzymes (Rubis CO, chal cone synthase, etc.) has been revealed.レタス Water-absorbing seeds で, GS light-induced される伝子が见つかれば, それらに Common するstructural special research できるものと考え, differential The hybridization method is により, その検出を行なった.その results, コロニーabout 1000に対し1のcut and combine, light conditions でのThe み検出できるクローンを小なくともseveral separation することができた. Now, the nature of the character is the tune.

项目成果

竹葉剛: 植物の生長調節に関する日米セミナー(ハワイ)論文集. 22-23 (1986)

Tsuyoshi Takeba：日美植物生长调节研讨会论文集（夏威夷）22-23（1986）。

竹葉剛 他: 日本植物生理学会1987年度年会.

Tsuyoshi Takeba 等人：1987 年日本植物生理学家学会年会。