光および植物ホルモンによるグルタミン合成酵素誘導機構の解明

阐明光和植物激素诱导谷氨酰胺合成酶的机制

基本信息

批准号：
61229009
负责人：
竹葉剛
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61229009/
关键词：
光発芽グルタミン合成酵素光誘導 cDNAライブラリー遊離核転写系

项目摘要

1.レタスの発芽調節に関する従来のデータを再整理し、また、必要な実験結果を追加することにより、環境因子(光・温度)および植物ホルモンによる発芽調節機構を示すモデルを発表した。(第5回日米セミナー・ハワイ)。2.光照射したレタス吸水種子からmRNAを調製し、Gubler Hoffman法によりcDNAを合成した。これを用いて、pUC9ベクターによるcDNAライブラリー(【10^5】コロニー)、λgt11によるライブラリー(5×【10^5】プラーク)を作製した。プラスミドライブラリーには合成オリゴヌクレオチドを用い、またλgt11ライブラリーに対してはGS抗体を用いてスクリーニングしたところ、それぞれ複数のポジティブクローンを得た。現在、それらの構造を解析中である。3.遺伝子の発現機構を解明するためには、in vitro転写系を確立することが必要であるが、植物ではまだ完全な系は実現していない。そのため、遊離核レベルの転写系を確立した。光照射したレタス吸水種子からpercollグラジェント法で核を単離し、〔3,5-T〕UTPを取り込ませたところ、高い転写活性を示した。現在、上記2で得たGSクローンcDNAとハイブリッドするRNAを検出している。この系は今後「光誘導因子」のassay系として役立つものと思われる。4.光誘導を受ける植物酵素(Rubis CO,chal cone synthase等)の遺伝子では5′側に「光依存調節領域」の存在することが判明している。レタス吸水種子で、GS以外に光誘導される遺伝子が見つかれば、それらに共通する構造上の特徴が研究できるものと考え、differential hybridization法により、その検出を行なった。その結果、コロニー約1000に対し1個の割合で、光条件でのみ検出できるクローンを少なくとも数個分離することができた。現在、それらの性質を調べている。

1。我们发表了一个模型，该模型通过对环境因素（光和温度）和植物激素的发芽调节机制进行了重新组织，对发芽调节调节生菜的调节并添加必要的实验结果来调整传统数据。（夏威夷第5届日本 - 美国研讨会）。 2。通过用光照射的莴苣吸收种子制备mRNA，并通过Gubler Hoffman方法合成cDNA。使用此过程，准备了使用PUC9载体（[10^5]菌落）的cDNA库和使用λgt11（5×[10^5] plaques）使用PUC9载体的库。合成寡核苷酸用于质粒文库，并使用GS抗体筛选λGT11库，从而产生多个阳性克隆。他们的结构目前正在分析中。 3。为了阐明基因表达机制，有必要建立一个体外转录系统，但是在植物中尚未实现完整的系统。因此，建立了自由核水平的转录系统。用Percoll梯度方法从用光照射的莴苣吸收种子中分离核，并掺入[3,5-T] UTP，并显示出较高的转录活性。当前，正在检测到与上述2中获得的GS克隆cDNA杂交。将来，该系统可能是“光诱导器”的测定系统。 4。已经发现，在植物酶基因的5侧有一个“光依赖性调节区”，该酶经历了光诱导（Rubis CO，Chal Cone Synthase等）。如果在吸水种子中发现了除GS以外的光基因，则可以研究它们常见的结构特征，并使用差分杂交方法进行检测。结果，只有在光条件下才能检测到的至少几个克隆可以以每1000个菌落的速度为单位。目前，我们正在研究它们的特性。