HIF-1抑制分子IPAS遺伝子の発現調節機構の解明

阐明HIF-1抑制IPAS基因的表达调控机制

• 批准号: 15024215
• 负责人: 田中 廣壽
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024215/
• 关键词: 核酸; ゲノム; シグナル伝達; 発現制御; バイオテクノロジー; 転写; スプライシング

申請者らは、低酸素誘導性転写因子HIF-1機能を抑制性に調節する新たなbHLH-PAS型転写因子IPAS(=inhibitory PAS protein)を発見した。IPASはHIF-1α機能を阻害し、固形がん発育を抑制する。また、IPASのmRNAレベルでの発現はHIF-1αのparalogueであるHIF-3αと共通の遺伝子の低酸素依存性選択的スプライシングによって制御される。(1)生体内IPAS発現パターンの解析正常マウス、低酸素下飼育マウス各組織におけるIPASの発現パターンを比較・解析した結果、IPASmRNAの発現は、低酸素依存性であること、発現組織は比較的限定されていること、がわかった。とくに、肺、心臓に発現が多く、肺疾患や虚血性心疾患などの病態との関連が示唆される。現在、HIF-3αを含めた他のスプライシングバリアントの発現量とともに定量的PCR法を用いて検討中である。IPAS蛋白に対する抗体をラビットを免疫して樹立した。その発現を各組織別に免疫組織染色,Western blot法で解析中である。(2)IPAS発現制御機構の解析IPAS/HIF-3αゲノムを含むBACクローンを基にIPAS特異的スプライシング産物生成に関わる領域を含むmini geneおよびそのdeletion constructを作成した。正常/低酸素下培養細胞の核抽出液を用いたin vitro splicing assayにより低酸素依存性スプライシングに寄与する塩基配列を同定中である。今後、同様に、各種mini geneを細胞に導入し,細胞内でのsplicing assayを行う予定である。さらに、同定された塩基配列に対する各種RNA結合蛋白の結合を検定するとともに、低酸素依存性IPAS特異的スプライシングに寄与する制御蛋白の同定を試みる。

Applicants ら は, low acid induced planning write function を inhibitory factor HIF - 1 に adjust す る new た な bHLH type - PAS planning write factor IPAS (= inhibitory PAS protein) を 発 see し た. The functions of IPAS <s:1> HIF-1α are を to prevent <s:1>, to solidify がん, to develop を and to inhibit する. ま た, IPAS の mRNA レ ベ ル で の 発 は HIF - 1 alpha now の paralogue で あ る HIF - 3 alpha と の common heritage 伝 son の low acid hormone dependence sentaku ス プ ラ イ シ ン グ に よ っ て suppression さ れ る. (1) born in IPAS 発 now パ タ ー ン の parsing normal マ ウ ス, feeding and breeding under low acid element マ ウ ス organizations に お け る IPAS の 発 now パ タ ー ン を comparison, analytical し た results, IPASmRNA の 発 は now, low acid dependency で あ る こ と, 発 organization は now more qualified さ れ て い る こ と, が わ か っ た. と く に heart, lung, and viscera に 発 が now more く や virtual hemorrhagic heart disease, lung disease な ど の pathological と の masato even が in stopping さ れ る. Now, HIF - 3 alpha を め た he の ス プ ラ イ シ ン グ バ リ ア ン ト の 発 now quantity と と も を に quantitative PCR method with い て 検 beg in で あ る. IPAS protein に against する antibody をラビットを immunity <s:1> て establishment <s:1> た. Youdaoplaceholder0 shows を of each tissue に immunohistostaining,Western blot method で analysis である. (2) the IPAS 発 system now royal institution の parsing IPAS/HIF - 3 alpha ゲ ノ ム を containing む BAC ク ロ ー ン を base に IPAS specific ス プ ラ イ シ ン グ product generated に masato わ を る field containing む mini gene お よ び そ の deletion construct を made し た. Under normal/low acid element culture cell nuclear extract の を with い た in vitro splicing assay に よ り low acid hormone dependence ス プ ラ イ シ ン グ に send す る salt base with column を with fixed in で あ る. In the future, the same に, various mini geneを cells に were introduced into を, and the で <s:1> splicing assayを in the cells was う prefixed である. さ ら に, with さ れ た salt base with column に す seaborne る various RNA binding protein の combining を 検 set す る と と も に, low acid dependency IPAS specific ス プ ラ イ シ ン グ に send す る suppression protein の with fixed を try み る.

项目成果

Tsunenori Kodama, et al.: "Role of the Glucocorticoid Receptor for Regulation of Hypoxia-denendent Gene Expression"J.Biol.Chem.. 278・35. 33384-33391 (2003)

Tsunenori Kodama 等：“糖皮质激素受体对缺氧相关基因表达的调节作用”J.Biol.Chem.. 278・35（2003）。

Matsumoto M., et al.: "Induction of renoprotective gene expression by cobalt ameliorates ischemic injury of the kidney in rats."J.Am.Soc.Nephrol.. 14・7. 1825-1832 (2003)

Matsumoto M., et al.：“钴诱导肾脏保护基因表达改善大鼠肾脏缺血性损伤。”J.Am.Soc.Nephrol.. 14・7 (2003)。

Rika Ouchida, et al.: "Suppression of NF-κB-dependent gene expression by a hexamethylene bisacetamide-inducible nuclear protein HEXIM1 in human vascular smooth muscle cells."Genes to Cells. 8・2. 95-107 (2003)

Rika Ouchida 等人：“人血管平滑肌细胞中六亚甲基双乙酰胺诱导核蛋白 HEXIM1 对 NF-κB 依赖性基因表达的抑制”，Genes to Cells 8·2 (2003)。

Yuichi Makino, et al.: "Hypoxia-Inducible Factor Regulates Survival of Antigen Receptor-Driven T Cells."J.Immunol.. 171・12. 6534-6540 (2003)

Yuichi Makino 等：“缺氧诱导因子调节抗原受体驱动的 T 细胞的存活。”J.Immunol.. 171・12 (2003)。