癌の免疫学的監視機構からの逸脱におけるRCAS1分子の意義

RCAS1分子在偏离癌症免疫监视机制中的意义

• 批准号: 15025256
• 负责人: 中島 学
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025256/
• 关键词: RCAS1; K562; Signal pathway; Tyrosine Phosphorylation; Cell cycle arrest

我々が樹立したモノクローナル抗体(22-1-1)が認識する抗原(RCAS1)分子は、広汎なヒト癌細胞で発現が認められ、その発現の程度は、癌の進展や予後不良との間で強い相関が見出され、本抗原が癌マーカーとして非常に有用であることを明らかにしてきた。さらに、22-1-1抗体が認識する分子のcDNA(RCAS1)を単離し、リコンビナント蛋白を用いた実験で、活性化免疫細胞や造血系細胞などにおいて、RCAS1分子に結合する分子(RCAS1レセプター)が発現すること、活性化T細胞の増殖がRCAS1との結合により停止し、ついでアポトーシスが生じることを明らかにした。RCAS1レセプター陽性K562細胞を用いたシグナル解析にて、刺激後5分より約70kDaの分子のチロシンリン酸化が誘導された後、サイクリンD3の転写因子の一つであるSP1の量的減少に続いて、サイクリンD3の特異的な減少、高リン酸化Rb蛋白の減少が経時的に誘導されることによりK562細胞の細胞周期が停止し、さらに細胞死(アポトーシス)が誘導される事が明らかになった。この刺激後早期にリン酸化される蛋白分子の同定を目的として、K562細胞をRCAS1にて刺激5分後に抗リン酸化チロシン抗体(PY100)にてチロシンリン酸化蛋白を免疫沈降し、一次元SDS-PAGE電気泳動法にて展開後、目的蛋白を切出し、ゲル内トリプシン消化後マス・スペクトロメーターにて解析を行い、いくつかの候補分子の検出に成功した。現在、免疫沈降されたチロシンリン酸化蛋白を二次元電気泳動法にて展開する事で、さらに目的分子の純度を上昇させた後、マス・スペクトロメーターにて解析することで候補分子の再確認を行うと共に、候補分子に対する抗体を用いて検定を行っている。

The antigen (RCAS1) molecule was found to be highly relevant to the development and progression of cancer cells. In addition, 22-1-1 antibody recognizes the cDNA of the molecule (RCAS1), and the protein is used in the activation of immune cells and hematopoietic cells. The molecule (RCAS1) binding to the RCAS1 molecule is generated. The proliferation of activated T cells and the binding of RCAS1 are stopped. RCAS1-positive K562 cells were treated for 5 minutes after stimulation with a protein of approximately 70kDa. After stimulation, the amount of SP1 was reduced. The specific reduction of RCAS1-D3 and the reduction of highly acidified Rb protein were induced. The cell cycle of K562 cells was arrested. The cell death was induced by the virus. After stimulation, the protein molecules were isolated from K562 cells by RCAS1. After 5 minutes of stimulation, the protein molecules were isolated from K562 cells by primary SDS-PAGE electrophoresis. The candidate molecule was successfully detected. Now, after the purification of target molecules by two-dimensional electrokinetic method, candidate molecules are reconfirmed and identified.

项目成果

K.Leerawat: "Upregulation of tumour associated antigen RCAS1 is implicated in high stage of colorectal cancer"J.Clin.Pathol.. 56(10). 764-768 (2003)

K.Leerawat：“肿瘤相关抗原 RCAS1 的上调与结直肠癌的高阶段有关”J.Clin.Pathol.. 56(10)。

Sonoda K: "Association between RCAS1 expression and clinical outcome in uterine endometrial cancer."Br.J.Cancer.. 89(3). 546-551 (2003)

Sonoda K：“RCAS1 表达与子宫内膜癌临床结果之间的关联。”Br.J.Cancer.. 89(3)。

Watanabe H: "Clinical significance of serum RCAS1 levels detected by monoclonal antibody 22-1-1 in patients with cholangiocellular carcinoma."J.Hepatology. 39(4). 559-563 (2003)

Watanabe H：“单克隆抗体 22-1-1 检测胆管细胞癌患者血清 RCAS1 水平的临床意义。”J. Hepatology。

Ohshima K: "Differential chemokine, chemokine receptor, cytokine and cytokine receptor expression in pulmonary adenocarcinoma : Diffuse down-regulation is associated with immune evasion and brain metastasis."Int.J.Oncol.. 23(4). 965-973 (2003)

Ohshima K：“肺腺癌中趋化因子、趋化因子受体、细胞因子和细胞因子受体表达的差异：弥漫性下调与免疫逃避和脑转移相关。”Int.J.Oncol.. 23(4)。

Okada K: "Expression of tumor-associated membrane antigen, RCAS1, in human colorectal carcinomas and possible role in apoptosis of tumor-infiltrating lymphocytes."Mod.Pathol.. 16(7). 679-685 (2003)

Okada K：“肿瘤相关膜抗原 RCAS1 在人类结直肠癌中的表达以及在肿瘤浸润淋巴细胞凋亡中的可能作用。”Mod.Pathol.. 16(7)。