成熟脳における神経幹細胞の役割:イムノトキシン細胞標的法を用いたモデル脳による記憶・学習とストレスに対する影響の解析

神经干细胞在成熟大脑中的作用：使用免疫毒素细胞靶向方法使用模型大脑分析对记忆/学习和压力的影响

• 批准号: 15029248
• 负责人: 西 真弓
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15029248/
• 关键词: 神経幹細胞; 記憶・学習; 海馬; イムノトキシン; トランスジェニックマウス; ストレス; Adult neurogenesis; GFP

本研究では、大きく分けて二つのアプローチを用いた。(1)ネスチンのプロモーター/エンハンサーの構築を用いてIL-2R/GFPをトランスジェニックマウスに発現させ、シュードモナス外毒素の一部を融合したimmunotoxinの脳内局所投与と組み合わせることにより神経幹細胞を時空間特異的に除去させる事が出来る実験動物を開発し、海馬による空間学習のモデルにより神経幹細胞選択的除去の記憶・学習に対する影響を観察する。これまでに作成したトランスジェニックマウス数ラインを解析したところrostral migratory streamに弱いGFPの免疫原性を認めたが、GFPそのものの蛍光では信号が認められなかったため、より効率の高い遺伝子導入が期待されるlentivirus vectorを用いてtransgeneを導入するため、その構築を行っている。(2)ストレス応答を制御するグルココルチコイドレセプター(GR)のプロモーターの下流にGFPまたはRFPを発現するトランスジェニックマウスを作成し、(1)の動物あるいはネスチンのプロモーター/エンハンサーの下流でGFPまたはそのcolor variantを発現するトランスジェニックマウスとのダブルトランスジェニックを作成する。その上でストレス負荷、副腎摘出等によりこれらの分子を発現する神経細胞の神経回路形成ヘの関与、脳内での動態の変化を解析する。まずGRのプロモーターの下流にGFPを繋いだトランスジェニックマウスを作成し、固定した成熟脳でのGFPの発現を解析したところ海馬領域においてGFP陽性細胞とGR免疫陽性細胞とがほぼ100%一致しており、海馬における解析に使用できることが確認された。また、生後5日の海馬の初代培養神経細胞においてもGFP陽性細胞を認めた。このマウスにおいては、GFPが細胞体のみならず神経突起にも拡散して分布するため、核内レセプターであるGR陽性細胞の形態をGFPの蛍光を指標に観察することができた。

This study is about the use of two kinds of drugs. (1)IL-2R/GFP was used to develop and integrate part of the exotoxin into the tissue of the stem cell. The fusion was performed on the tissue of the stem cell. Effects of spatial learning on neural stem cell selection This is the first time that a virus vector has been constructed with a high efficiency gene. (2)(1) The animals in the plant have the ability to generate color variants of GFP in the downstream of the plant. The relationship between the formation of neurocircuits in neurons and the analysis of the dynamic changes in the brain due to the molecular development of the brain, such as the stress load on the brain and the extraction of the accessory kidney. The GFP expression in the downstream of GR and GR immunopositive cells was analyzed in the hippocampus region. The GFP expression in the downstream of GR and GR immunopositive cells was 100% consistent with that in the hippocampus. GFP-positive cells were identified in primary cultured neurons of hippocampus on day 5 after birth. The distribution of GR-positive cells in the nucleus and the morphology of GR-positive cells in the nucleus were observed by GFP.

项目成果

神経系における核内レセプターの動態

神经系统核受体的动态

• 发表时间: 2004
• 期刊: ホルモンと臨床 52
• 作者: 河田光博

Shuttling components of nuclear import machinery involved in nuclear translocation of steroid recntors exit nucleus via exnortin-1/CRM-1 independent pathway

参与类固醇受体核易位的核输入机器的穿梭组件通过 exnortin-1/CRM-1 独立途径退出细胞核

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochim Biophys Acta-Mol Cell Res 1691
• 作者: Itoh H;Shimizu M;Mabuchi H;Imoto K;Sonohata M et al.;Kumar T
• 通讯作者: Kumar T

Tanaka M: "Nuclear import of glucocorticoid receptor in association with importin a and importin b : Analysis with real-time fluorescence imaging and fluorescence resonance energy transfer in living cells."Endocrinology. 144. 4070-4079 (2003)

Tanaka M：“糖皮质激素受体的核输入与输入 a 和输入 b 相关：活细胞中实时荧光成像和荧光共振能量转移的分析。”内分泌学。

Estrogen reduces the neurite growth of serotonergic cells expressing estrogen receptors

• DOI: 10.1016/j.neures.2004.06.010
• 发表时间: 2004-09-01
• 期刊: NEUROSCIENCE RESEARCH
• 影响因子: 2.9
• 作者: Lu, HP;Nishi, M;Kawata, M
• 通讯作者: Kawata, M

Imaging analysis of subcellular correlation of androgen receptor and estrogen receptor α in single living cells using GFP color variants

使用 GFP 颜色变体对单个活细胞中雄激素受体和雌激素受体 α 的亚细胞相关性进行成像分析

• 发表时间: 2004
• 期刊: Molecular Endocrinology 18
• 作者: Tsumori T;Yokota S;Kishi T;Qin Y;Oka T;Yasui Y.;S.Yokota;Minjuan Pei;Fang Han;河田光博;Kentaro Mori;Yoichi Ueta;Ikuo Ochiai
• 通讯作者: Ikuo Ochiai