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グルタミン酸受容体のリン酸化と神経回路形成の分子生物学的研究

谷氨酸受体磷酸化和神经回路形成的分子生物学研究

基本信息

批准号：
15029258
负责人：
中井淳一
金额：
$ 4.22万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15029258/
关键词：
グルタミン酸受容体神経活動 LTP GFP リン酸化神経回路興奮性シナプス

项目摘要

グルタミン酸受容体は興奮性神経伝達に関与し、シナプスの長期増強(LTP)のメカニズムとしてAMPA型グルタミン酸受容体のリン酸化により膜への受容体の組み込みやチャネル活性の増加が関与しているという報告がある。また脱リン酸化によるLTDも報告されている。この研究ではAMPA型グルタミン酸受容体のリン酸化を可視化するための蛍光センサーを試作し、試作したセンサーを用いてグルタミン酸受容体の活動を時間的空間的に捉え、神経回路に及ぼす作用を明らかにすることを目的とする。AMPA型グルタミン酸受容体のC末端の細胞内領域に存在するカルシウムカルモジュリン依存性キナーゼII (CaMKII)およびAキナーゼによりリン酸化部位を含むアミノ酸配列の前後に、GFPの変異体であるYFPおよびCFPを付加した蛍光センサー分子のcDNAを試作した。試作したセンサーの機能を調べるため、センサーcDNAをHEK293細胞に発現させ、リン酸化を即す刺激により蛍光変化を測定した。Aキナーゼを活性化するForskolinおよびdibutyryl cAMPによる刺激ではYFP/CFPの蛍光比の微弱な増加が観測された。またCaMKIIを刺激するためIonomycinを投与した結果、明らかなYFP/CFPの蛍光比の増加が観測された。今回、グルタミン酸受容体のリン酸化のFRETを用いた蛍光センサーを作成した。リン酸化刺激により蛍光変化が観察された。しかし、その程度は小さく、実用的には検出感度の点でまだ厳しく、神経回路の検討にまでは至れなかった。

The long-term enhancement (LTP) of the excitatory neurotransmitter in the acid receptor was reported. The company reports to the public. This study aims to visualize the activity of AMPA-type acid receptors in the light of time and space, and to clarify the role of the nervous system and the environment. AMPA-type acid receptor C-terminal intracellular domain existence of A variety of C-terminal dependent protein II (CaMKII) and A protein acid sites containing C-terminal acid alignment before and after, GFP heterogeneic, YFP and CFP, and the addition of C-terminal dependent protein cDNA. We tried to modulate the function of HEK293 cells, and we tried to modulate the function of HEK293 cells. A slight increase in the luminance ratio of YFP/CFP was detected by stimulation of Forskolin and dibutyryl cAMP. The results of CaMKII stimulation showed that the ratio of YFP/CFP increased. Now, the FRET of the acid receptor is used to prepare the solution. The acid stimulation is detected by light. The degree of sensitivity is small, the sensitivity is small, and the sensitivity of the mental circuit is small.