興奮収縮連関におけるリアノジン受容体の構造と機能の研究

兰尼碱受体兴奋-收缩耦合结构与功能研究

• 批准号: 09257244
• 负责人: 中井 淳一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257244/
• 关键词: カルシウム放出チャネル; リアノジン受容体; 電位依存性カルシウムチャネル; ジヒドロピリジン受容体; 興奮収縮連関; 分子生物学

骨格筋において細胞膜の電位依存性L型カルシウムチャネル(ジヒドロピリジン受容体、DHPR)と筋小胞体のリアノジン受容体は興奮収縮連関の中心的機能を果たしている。この2つの分子は蛋白どうしが結合して情報伝達を行っていると考えられているが、その分子機構は明らかになっていない。先に我々は骨格筋型リアノジン受容体(RyR-1)はDHPRと相互に作用しあうが、心筋型リアノジン受容体(RyR-2)はDHPRと相互に作用しないことを見い出した。この実験の目的はRyR-1とRyR-2のこの機能の差に着目し、分子生物学的方法を用いて興奮収縮連関におけるリアノジン受容体とDHPRの相互の活性化機構を明らかにすることである。実験方法:RyR-1とRyR-2のキメラcDNAを作製し、RyR-1遺伝子を欠くdyspedic mouseの培養骨格筋細胞に発現させた。パッチクランプ法と蛍光カルシウム測定法によりカルシウム電流とカルシウム放出をそれぞれ測定した。その結果、foot領域にRyR-1のアミノ酸配列を含むキメラR1を発現させた細胞では骨格筋型の興奮収縮連関もカルシウムチャネルの機能もどちらも回復していた。次にキメラのRyR-1の領域をさらに狭めていき、最終的に1635-2636番目のアミノ酸にのみRyR-1の配列を含むキメラR10を発現させた。このR10を発現させた細胞は骨格筋型の興奮収縮連関もカルシウムチャネルの機能もどちらも回復していた。また、RyR-1(2689-3720)のアミノ酸配列を含むキメラR9を発現させた細胞ではカルシウムチャネルの機能の回復のみを認め、骨格筋型の興奮収縮連関の回復は認めなかった。以上の結果から、L型カルシウムチャネルとリアノジン受容体(RyR-1)との蛋白蛋白相互作用がRyR-1のfoot領域を介して行われることが明らかになった。さらにリアノジン受容体の少なくとも2カ所の異なる部位がこの相互作用に関係することが明らかとなった。

Cell membrane electric potential dependence of skeletal tendons. The function of the small cell bodies of the L-type skeletal muscle cells (DHPR) is different from that of the receptor. In the light of the combination of molecular protein and protein, we have reached the conclusion that we should make sure that the information is correct, and that the molecular organization can tell you that it is necessary to make sure that it is not necessary. First of all, let's talk about the interaction between the RyR-1 (RyR-1) and DHPR (DHPR), and the interaction between the DHPR and the heart. The purpose of this study is to determine the mechanism of RyR-1 and RyR-2. The molecular biology method is used to determine the activity of the capacitor, the DHPR, and the interactivating mechanism. Methods: RyR-1, RyR-2, cDNA, RyR-1, dyspedic mouse, bone lattice, muscle, bone, bone The method was used to determine the temperature of the current current. The results show that the foot field RyR-1 equipment is equipped with the following information: R1l, the cell structure, the bone structure, the link, the link, the machine, the machine, the receiver, the receiver and the receiver. In the second place, the field of RyR-1 is very narrow, and the most important one, 1635-2636, is assigned to RyR-1 with the following information: RyR-1, R10. In R10, you can see that the cell is in the shape of a bone bar, and the link is in the shape of a bone. The device, RyR-1 (2689-3720), is equipped with the device R9 to show that the cell number is different. The machine is capable of reversing the load, and the skeleton type is connected to the device. The results of the above results show that the protein-protein interaction of receptor receptor (RyR-1) in the field of RyR-1 (foot) is not known in the field of protein interaction. There is no significant difference between the two parts of the receptacle in terms of interaction.

项目成果

Yasuyo Nakashima: "Molecular cloning and characterization of a human brain ryanodine receptor" FEBS Lett.417. 157-162 (1997)

Yasuyo Nakashima：“人脑兰尼碱受体的分子克隆和表征”FEBS Lett.417。

Robert T.Dirksen: "The S5-S6 linker of repeat I is a critical determinant of L-type CA^<2+> chanel conductance" J.Biophys.73. 1402-1409 (1997)

Robert T.Dirksen：“重复 I 的 S5-S6 连接子是 L 型 CA^<2> 通道电导的关键决定因素”J.Biophys.73。

Junichi Nakai: "Functional nonequality of the cardiac and skeletal ryanodine receptor" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 1019-1022 (1997)

Junichi Nakai：“心脏和骨骼兰尼碱受体的功能不平等”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。

Jesus Garcia: "Role of S4 Segments and the Leucine Heptad Motif in the Activation of an L-Type Calcium Channel" J.Biophys.72. 2515-2523 (1997)

Jesus Garcia：“S4 片段和亮氨酸七肽基序在 L 型钙通道激活中的作用”J.Biophys.72。