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Rho蛋白質と神経細胞のリモデリングに関する研究

Rho蛋白与神经元重塑的研究

基本信息

批准号：
13041061
负责人：
中井淳一
金额：
$ 4.42万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13041061/
关键词：
GFP Rho 低分子量G蛋白質バイオセンサー分子生物学

项目摘要

低分子量G蛋白質のRhoは細胞の形態や細胞膜のラッフリング、平滑筋の収縮、細胞凝集、細胞運動、細胞分裂を制御している蛋白質である。この研究は低分子量G蛋白質RhoAとそのRhoAのシグナル伝達経路に関与する蛋白(特にRho Kinase)の活性を生細胞でリアルタイムに視覚化し、低分子量G蛋白質とそのカスケードの機能をin vivoで解析することを目的としている。計画は2年度にまたがっており、本年度はRho Kinaseに加えて、RhoA蛋白質と相互作用をすることが知られているRhoGDI, Rhotekin, Citron K蛋白質をクローン化し、Rho蛋白質との相互作用を視覚化することを試みた。RhoGDIなどの蛋白質にYFPを付加した遺伝子を作成し、CFPを付加したRhoAの活性型変異体であるRhoA-V14または不活性型変異体であるRhoA-N19を同時に細胞に発現させCFPとYFPの間のFRET効果を指標に蛋白間の相互作用を観察した。その結果RhotekinにおいてRhoA-V14とRhoA-N19の間で少ないながらFRETの差が見られた。今後蛍光変化が大きくなるようにデザインを検討しDNAの配列を調節していく。また神経細胞での視覚化に応用していく。また本研究領域のメンバーである京都大学の根岸教授と共同研究を行うこととなり、細胞の突起形成に関与すると考えられている新規の低分子量G蛋白質Rnd2とその効果器であるRapostlinとの蛋白間の相互作用を同様の方法で観察した。この試し実験においてFRETの変化が観察されたので、今後Rnd2についても視覚化を進め、神経細胞の突起形成のメカニズムを明らかにしていく。

Low molecular weight G protein is a protein that regulates cell morphology, cell membrane differentiation, smooth muscle contraction, cell aggregation, cell movement, and cell division. The aim of this study is to analyze the function of low molecular weight G protein RhoA in vivo, which is related to the pathway of RhoA and protein (especially RhoKinase) activity in living cells. This year, RhoGDI, Rhotekin and Citron K protein interactions will be investigated. RhoGDI protein, YFP protein, protein production, CFP protein, RhoA active variant, RhoA-V14 inactive variant, RhoA-N19 protein, CFP protein, YFP protein, FRET protein, protein interaction. The result is Rhotekin, RhoA-V14, RhoA-N19 and FRET. In the future, the light will change greatly, and the DNA will be adjusted accordingly. Also, neurons are used for visualization. Professor Negishi of Kyoto University has conducted joint research on the relationship between cell processes and the development of new low molecular weight G protein Rnd2 and the interaction between Raposlin proteins. This test is the first time that FRET has been detected. In the future, Rnd2 will be the first time that FRET has been detected. In the future, it will be the second time that FRET has been detected. In the future, it will be the first time that the FRET has been detected. In the future, it will be the second time that FRET has been detected. In the future, it will be the first time that the FRET has been detected. In the future, it will be the second time that the FRET has been detected. In the future, it will be the first time that the FRET has been detected. In the future, it will be the second time that the FRET has been detected.