Rho蛋白質と神経細胞のリモデリングに関する研究

Rho蛋白与神经元重塑的研究

• 批准号: 13041061
• 负责人: 中井 淳一
• 金额: $ 4.42万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13041061/
• 关键词: GFP; Rho; 低分子量G蛋白質; バイオセンサー; 分子生物学

低分子量G蛋白質のRhoは細胞の形態や細胞膜のラッフリング、平滑筋の収縮、細胞凝集、細胞運動、細胞分裂を制御している蛋白質である。この研究は低分子量G蛋白質RhoAとそのRhoAのシグナル伝達経路に関与する蛋白(特にRho Kinase)の活性を生細胞でリアルタイムに視覚化し、低分子量G蛋白質とそのカスケードの機能をin vivoで解析することを目的としている。計画は2年度にまたがっており、本年度はRho Kinaseに加えて、RhoA蛋白質と相互作用をすることが知られているRhoGDI, Rhotekin, Citron K蛋白質をクローン化し、Rho蛋白質との相互作用を視覚化することを試みた。RhoGDIなどの蛋白質にYFPを付加した遺伝子を作成し、CFPを付加したRhoAの活性型変異体であるRhoA-V14または不活性型変異体であるRhoA-N19を同時に細胞に発現させCFPとYFPの間のFRET効果を指標に蛋白間の相互作用を観察した。その結果RhotekinにおいてRhoA-V14とRhoA-N19の間で少ないながらFRETの差が見られた。今後蛍光変化が大きくなるようにデザインを検討しDNAの配列を調節していく。また神経細胞での視覚化に応用していく。また本研究領域のメンバーである京都大学の根岸教授と共同研究を行うこととなり、細胞の突起形成に関与すると考えられている新規の低分子量G蛋白質Rnd2とその効果器であるRapostlinとの蛋白間の相互作用を同様の方法で観察した。この試し実験においてFRETの変化が観察されたので、今後Rnd2についても視覚化を進め、神経細胞の突起形成のメカニズムを明らかにしていく。

Low molecular weight G protein の Rho は や membrane cells の form の ラ ッ フ リ ン グ, smooth muscle の 収 shrinkage, cell agglutination, cell movement, cell division を suppression し て い る protein で あ る. こ の research は low molecular weight G protein RhoA と そ の RhoA の シ グ ナ ル 伝 da 経 road に masato and す る protein (especially に Rho Kinase) の active を living cells で リ ア ル タ イ ム に visual 覚 し and low molecular weight G protein と そ の カ ス ケ ー ド を の function in vivo analytical す で る こ と を purpose と し て い る. Project は 2 year に ま た が っ て お り, this year's は Rho Kinase に plus え て, と RhoA protein interaction を す る こ と が know ら れ て い る RhoGDI, Rhotekin, Citron K protein を ク ロ ー ン し and Rho protein と の interaction を visual 覚 change す る こ と を try み た. RhoGDI な ど の protein に YFP を plus し た heritage 伝 を し consummate, CFP を plus し た RhoA の type activity - variant で あ る RhoA - V14 ま た は type activity - not variants で あ る RhoA - N19 を に cells at the same time に 発 now さ せ CFP と YFP の between の FRET unseen fruit を index に の を interaction between proteins Youdaoplaceholder0 observe た. そ の results Rhotekin に お い て RhoA - V14 と RhoA - N19 の で between less な い な が ら FRET の poor が see ら れ た. In the future, the 蛍 light variation が will be large, <s:1> くなるようにデザ, <s:1>, <s:1>, を検, を検 to explore the <s:1> DNA <s:1> arrangement を regulation, and the <s:1> て and く く く. Youdaoplaceholder0 economic cells で <s:1> visualize 覚 に応 with て て く く く く. ま た this research の メ ン バ ー で あ る の Kyoto university professor negishi と joint research line を う こ と と な り, の processes to form に masato and す る と exam え ら れ て い る new rules の low molecular weight G protein Rnd2 と そ の unseen GuoQi で あ る Rapostlin と の の を interaction between protein with others の way で 観 examine し た. Try こ の し be 験 に お い て FRET の variations change が 観 examine さ れ た の で, future Rnd2 に つ い て も visual 覚 を into め, god 経 の processes form の メ カ ニ ズ ム を Ming ら か に し て い く.

项目成果

Proenza C, O'Brien J, Nakai J, Mukherjee S, Allen PD, Beam KG.: "Identification of a region of RyR1 that participates in allosteric coupling with the alpha(1S) (Ca(V)1.1) II-III loop"J. Biol. Chem.. 277. 6530-6535 (2002)

Proenza C、OBrien J、Nakai J、Mukherjee S、Allen PD、Beam KG.：“鉴定参与与 alpha(1S) (Ca(V)1.1) II-III 环变构偶联的 RyR1 区域

Proenza, C.: "Identification of a region of RYR1 that Participates in allosteric coupling with the α_<1S>(CaV1.1)II-III looP"J. Biol. Chem.. 277. 6530-6535 (2002)

Proenza，C.：“参与 α_<1S>(CaV1.1)II-III 环变构偶联的 RYR1 区域的鉴定”J. Biol. 277. 6530-6535 (2002)

Protasi, F.: "Multiple regions of RyR1 mediate functional and structural interactions with α_<1S>-DHPR in skeletal muscle"Biophys. J.. 83. 3230-3244 (2002)

Protasi, F.：“RyR1 的多个区域介导骨骼肌中与 α_1S>-DHPR 的功能和结构相互作用”Biophys. 83. 3230-3244 (2002)

中井淳一: "GFPを用いた蛍光カルシウムプローブG-CaMPの開発"比較生理生化学. 19. 135-145 (2002)

Junichi Nakai：“使用 GFP 开发荧光钙探针 G-CaMP”比较生理生物化学 19. 135-145 (2002)。