インターフェロン誘導型抗ウイルス機構主要酵素リボヌクレアーゼLの構造と機能

干扰素诱导抗病毒机制的主要酶核糖核酸酶L的结构和功能

• 批准号: 15030237
• 负责人: 中村 和郎
• 金额: $ 3.97万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15030237/
• 关键词: 構造生物学; 結晶構造; 結晶化; X線; リボヌクレアーゼ; アンキリンリピート; インターフェロン; 抗ウイルス機構; 2-5A; 結晶構造解析; 核酸; タンパク質

本研究の目的は、新規抗ウイルス薬の合理的デザインに役立てるため、インターフェロン誘導型抗ウイルス機構2-5Aシステムの主要酵素であるヒトリボヌクレアーゼLの立体構造を解明することである。ヒトRNaseLは741アミノ酸残基から成り、N末側がアンキリンリピートドメイン(ANK)、中央部がキナーゼ類似ドメイン、C末側がRNaseドメインであると言われている。RNaseLは不活性型単量体として誘導されるが、2-5A(2',5'-結合オリゴアデニル酸)のANKへの結合により2量体化し活性型となるという仮説が提唱されている。我々は既にヒトRNaseLのANKと2-5Aとの複合体の結晶化に成功していたが、今年度は、PF-AR NW12を用いることにより、太さ20μm程度の針状結晶であったが、1.8Å分解能の回折強度データを得ることに成功した。人工アンキリンリピート構造に基づいて作成した6リピートからなる理想構造を用いた分子置換法による位相決定に成功し、遂に、ANK/2-5A複合体の立体構造を明らかにした(Tanaka, N.et al.,EMBO J.23,3929-3938(2004))。ヒトRNaseLのANKは、アンキリンリピートの8回繰り返し構造をとっており、リピート4と5の間に挿入ヘリックスが存在していた。2-5Aはリピート2から4の部分に結合しており、これまでのリピート7および8に結合するという説を覆す結果であった。2-5Aの一番目及び三番目のAMP部分は、それぞれ、リピート4および2と等価な結合様式で結合していた。興味深いことに、これら2-5A認識に関与するアミノ酸残基は、アンキリンリピートの繰り返し配列上で、等価な位置に存在していた。今回の構造解析の結果から、RNaseLに対してより高い活性化能を持ち、かつ生体内で安定な2-5A誘導体をデザインするための知見が得られた。

In this study, the purpose of this study is to establish a reasonable anti-virus mechanism, which is suitable for the purpose of this study. the purpose of this study is to establish a reasonable system for the purpose of this study. in this study, the purpose of this study is to establish a reasonable system for the purpose of this study. in this study, the purpose of this study is to determine the main enzymes in the anti-virus mechanism 2-5A. At the end of the RNaseL 741, the acid residue was detected, the N-terminal was broken, the acid residue was detected in the center (ANK), the RNase in the center was similar to the acid residue, and the acid residue was detected at the end of the C. RNaseL inactive body weight, 2-5A, 2-5 A, 2-5 A, 2, 5, 5, 5, 5, 5, 2, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 4, 5, 4, 5, 4, 5, 5, 5, 4, 5, 4, 5, 5, 4, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 4, 5, 4, 5, 4, 5, 4, 5, 4, 5, We have successfully crystallized the RNaseL ANK 2-5A complex, this year, PF-AR NW12, 20um, 1.8m, and 1.8m, respectively. Using the molecular method of molecular placement, the phase of the ANK/2-5A complex determines the success, the success and the ANK/2-5A complex (Tanaka, N.et al.,EMBO J.23Y3929-3938 (2004)). This is the first time that RNaseL ANK has been created, and that there has been an increase in the number of errors. 2-5A

项目成果

Crystallization of the N-terminal ankyrin repeat domain of the 2-5A dependent endoribonuclease, RNase L.

2-5A 依赖性核糖核酸内切酶 RNase L 的 N 末端锚蛋白重复结构域的结晶。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Protein Peptide Lett. 12(in press)
• 作者: Tanaka;N. et al.
• 通讯作者: N. et al.

Tanaka, Nakamura, et al.: "Crystallization of the N-Terminal Ankyrin Repeat Domain of the 2-5A-Dependent Endoribonuclease, RNase L"Protein and Peptide Letters. (発表予定). (2004)

Tanaka, Nakamura 等人：“2-5A 依赖性内切核糖核酸酶、RNase L 的 N 末端锚蛋白重复结构域的结晶”蛋白质和肽字母（即将出版）。