Bio-lipid産生酵素による新規な蛋白質翻訳後修飾と蛋白質運命の解析

通过生物脂质生成酶进行新型蛋白质翻译后修饰和蛋白质命运分析

• 批准号: 15032261
• 负责人: 金保 安則
• 金额: $ 2.82万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15032261/
• 关键词: ホスホリパーゼD; ホスファチジル化; 翻訳後修飾; セリン; ホスファチジル基転移反応; シグナル伝達; たんぱく質; 酵素; 脂質

ホスホリパーゼD(PLD)は様々なアゴニスト刺激により活性化され、生理的条件下では細胞膜構成リン脂質のホスファチジルコリン(PC)を加水分解してコリンとBio-lipidとして機能するホスファチジン酸(PA)を産生し、産生されたPAが下流因子へシグナルを伝達するが、反応系に一級アルコールが存在すると加水分解反応よりもむしろPCのホスファチジル基を一級水酸基に転移してホスファチジルアルコールを産生するホスファチジル基転移反応を優位に触媒する。蛋白質構成成分のアミノ酸のうちセリンは一級水酸基を有しており、蛋白質分子中のセリン残基がPLDによってホスファチジル化されてその機能が修飾されるという、今までに例を見ない新規の蛋白質翻訳後修飾の可能性が考えられ、この点について検討した。その結果、以下のような結果が今までに得られた。現在までに同定されているPLD1とPLD2の二種類のPLDアイソザイムのうち、リコンビナントPLD2を調製し、これを[^<32>P]PCと遊離セリン存在下でインキュベートすると、[^<32>P]ホスファチジルセリンが産生され、PLD2は遊離セリンをホスファチジル化することが明らかとなった。さらに、リコンビナントPLD2を[^<32>P]PCとインキュベートすると、PLD2への[^<32>P]の取り込みが認められたが、活性欠失型PLD2への取り込みは認められなかった。これらの結果から、PLD2はその活性依存的に自己ホスファチジル化される可能性が示唆された。さらに、リコンビナントPLD2を[^<32>P]PC存在下でJ774.1細胞の膜画分とインキュベートすると、数種類の蛋白質への[^<32>P]の取り込みが観察された。このことから、細胞膜蛋白質がPLD2によりホスファチジル化されることが示唆された。

ホ ス ホ リ パ ー ゼ D (PLD) は others 々 な ア ゴ ニ ス ト stimulus に よ り activeness さ れ, physiological conditions で は membrane composition リ ン lipid の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン (PC) を hydrolytic decomposition し て コ リ ン と Bio - lipid と し て function す る ホ ス フ ァ チ ジ ン acid (PA) を し, produce さ れ た PA が obscene Child へ シ グ ナ ル を 伝 da す る が, anti 応 に level ア ル コ ー ル が exist す る と hydrolytic decomposition against 応 よ り も む し ろ PC の ホ ス フ ァ チ ジ ル base を level water acid radical に planning move し て ホ ス フ ァ チ ジ ル ア ル コ ー ル を produce す る ホ ス フ ァ チ ジ ル base planning to move the 応 を primacy に catalyst す る. Protein composition の ア ミ ノ acid の う ち セ リ ン は level water acid base を し て お り, protein molecules の セ リ ン residues が PLD に よ っ て ホ ス フ ァ チ ジ ル change さ れ て そ の function が modified さ れ る と い う, today ま で に example を see な い new rules の protein modification after turn 訳 の possibility が exam え ら れ, こ の point に つ い て beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 そ result, the following ような ような result が today までに we get られた. Now ま で に with fixed さ れ て い る PLD1 と PLD2 の two kinds の PLD ア イ ソ ザ イ ム の う ち, リ コ ン ビ ナ ン ト PLD2 を modulation し, こ れ を [^ < > 32 P] PC と free セ リ ン presence で イ ン キ ュ ベ ー ト す る と, [^ < > 32 P] ホ ス フ ァ チ ジ ル セ リ ン が produce さ れ, PLD2 は free Youdaoplaceholder0 セリ をホスファチジ をホスファチジ する する とが Ming ら となった となった. さ ら に, リ コ ン ビ ナ ン ト PLD2 を [^ < > 32 P] PC と イ ン キ ュ ベ ー ト す る と, PLD2 へ の [^ < > 32 P] の take り 込 み が recognize め ら れ た が type, active owe lost PLD2 へ の take り 込 み は recognize め ら れ な か っ た. The <s:1> れら れら results show that the に ら and PLD2 そ そ are active dependent on the に self-ホ スファチジ and される possibilities が suggest された. さ ら に, リ コ ン ビ ナ ン ト PLD2 を [^ < > 32 P] in the presence of PC で の J774.1 cell membrane draw points と イ ン キ ュ ベ ー ト す る と, several kinds の protein へ の [^ < > 32 P] の take り 込 み が 観 examine さ れ た. <s:1> と と ら, cell membrane protein がPLD2によ ら ホスファチジ, ホスファチジ, される とが, とが and された.

项目成果

Phospholipase D2 functions as a downstream signaling molecule of MAP kinase pathway in L1‐stimulated neurite outgrowth of cerebellar granule neurons

• DOI: 10.1111/j.1471-4159.2004.02308.x
• 发表时间: 2004-04
• 期刊: Journal of Neurochemistry
• 影响因子: 4.7
• 作者: Hiroshi Watanabe;Masakazu Yamazaki;Hideyuki Miyazaki;Chihiro Arikawa;K. Itoh;Takehiko Sasaki;T. Maehama;M. Frohman;Y. Kanaho

Regulation of anaphylactic responses by phosphatidylinositol phosphate kinase type I α.

磷脂酰肌醇磷酸激酶 I α 调节过敏反应。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Experimental Medicine 201
• 作者: 酒井大輔;若松義雄;若松義雄;J.SASAKI
• 通讯作者: J.SASAKI

Y.Kanaho et al.: "Activation of PI(4)P 5-kinase by small G protein"Adv.Enzyme Regul.. 43. 107-119 (2003)

Y.Kanaho 等人：“小 G 蛋白激活 PI(4)P 5-激酶”Adv.Enzyme Regul.. 43. 107-119 (2003)

Phospholipase D1-promoted release of tissue plasminogen activator facilitates neurite outgrowth

• DOI: 10.1523/jneurosci.4850-04.2005
• 发表时间: 2005-02-16
• 期刊: JOURNAL OF NEUROSCIENCE
• 影响因子: 5.3
• 作者: Zhang, Y;Kanaho, Y;Tsirka, SE
• 通讯作者: Tsirka, SE

細胞内シグナル伝達研究法

细胞内信号转导研究方法

• 发表时间: 2004
• 作者: F.Okahara;K.Itoh;M.Ebihara;M.Kobayashi;H.Maruyama;Y.Kanaho;T.Maeharma;Y.Zhang et al.;C.Kojima et al.;F.Okahara et al.;H.Watanabe et al.;H.Watanabe et al.;J.Sasaki et al.;金保安則;金保安則 他
• 通讯作者: 金保安則 他